猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白（MOMP）基因的分析及重组表达作者：闫少侠,田永祥,泽文,袁芳艳,郭锐,段正赢,克礼,孟丽,周丹娜,栗绍文：《农业科学》2013年第04期摘要：根据GenBank中衣原体主要外膜蛋白（MOMP）全基因序列设计特异性引物，以临床分离的衣原体病原中提取的衣原体全基因组为模板，利用特异性引物PCR扩增得到MOMP全基因序列。通过BLAST比对，结果显示其与已提交的猪流产衣原体CG1株的MOMP序列（EU531729）有1个碱基不同。根据对测序结果进行信号肽序列预测及切酶位点分析，选用BamHⅠ和SalⅠ双酶切将目的蛋白序列克隆到表达载体pET-28a上，得到重组质粒pET-28a-MOMP。将重组质粒转化入E.coliBL21进行表达，表达产物使用镍离子亲和层析柱进行纯化得到目的蛋白rMOMP。目的蛋白经Western-blot检测，证明其具有免疫学活性。关键词：猪流产嗜性衣原体；主要外膜蛋白（MOMP）；重组表达：S852.67文献标识码：A：0439-8114（2013）04-0949-04CloningandExpressionofMajorOuterMembraneProteinofChlamydophilaClinicalStrainHB1043fromSwineYANShao-xia1，2，TIANYong-xiang1，LIUZe-wen1，YUANFang-yan1，GUORui1，DUANZheng-ying1，YANGKe-li1，MENGli1，ZHOUDan-na1，LIShao-wen2（1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary，HubeiAcademyofAgriculturalSciences，Wuhan430064，China；2.CollegeofAnimalScienceandTechnology，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China）Abstract：Chlamydophilawasanobligateintracecullarparasitesandcouldinfecthumanandmultipleanimals.AccordingtothepublishedcompletenucleotidesequenceofChlamydophilamajoroutermembraneprotein（MOMP）intheGenBankandthewholegenomeofChlamydophilaisolatedfromclinicalsamples，thewholegenomesequenceofMOMPgenewereobtainedbyPCR.ThePCRproductwassequencedandblastedwiththecommittedMOMPsequence（EU531729）fromstrainCG1ofswineChiamydophilaabortus.TheresultsshowedthatithadonebasedifferentfromtheCG1strain.TheextinctionenzymessitesBamHandSalwereselectedforcloningtheⅠⅠMOMPsequencetothepET-28a.TherestructuringplasmidpET-28α-MOMPwerethentransferedintoE.coliBL21andexpressed.ThetargetproteinrMOMPwaspurifiedbytheNiSepharose6FastFlowandprovedwithimmunocompetencebyWestern-blot.Keywords：Chlamydophila；majoroutermembraneprotein；recombinedexpression---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---衣原体是一类细胞专性寄生的、大小介于细菌和病毒之间的革兰氏阴性微生物。衣原体感染在世界围均有流行，是一种能够引起人和动物患病的人畜共患病原体。依据衣原体核糖体rRNA的序列比对以及多态性限制性酶切位点的分析，将衣原体科分为衣原体属和嗜性衣原体属。嗜性衣原体属包含鹦鹉热嗜性衣原体、流产嗜性衣原体、肺炎嗜性衣原体、家畜嗜性衣原体、猫嗜性衣原体以及豚鼠嗜性衣原体[1]。其中，危害最大的病原体主要是流产嗜性衣原体和鹦鹉热嗜性衣原体。流产嗜性衣原体是从鹦鹉热嗜性衣原体中衍生出来的一个新成员，这两种病原体都可以感染猪、绵羊、山羊、牛等哺乳动物，同时作为一种人畜共患的病原体，经常与感染动物接触的人可经呼吸道传播的途径发生感染。人类感染后主要表现为类似流感的病症，严重时可引起心膜炎、脑炎、肺炎、流产甚至死亡[2]。近些年来，研究者对衣原体的基因组学以及蛋白质组学进行了深入的研究，但是针对衣原体病的诊断目前尚没有十分成功的试剂盒得以推广应用。根据以往的研究报道，作为研究热点的诊断抗原蛋白有主要外膜蛋白（MOMP）、多型性外膜蛋白（POMPs）、热休克蛋白（HSP）以及脂多糖（LPS）等。其中40ku的衣原体MOMP占衣原体外膜蛋白的60%以上，具有血清型、亚种、种和属特异性抗原决定簇，是衣原体病诊断的主要研究抗原[3]。有研究者对流产嗜性衣原体的CP/12株的MOMP、E型沙眼衣原体的MOMP以及鸡源鹦鹉热衣原体的MOMP全长基因进行了克隆表达[4-6]。本试验所用的...