海豚链球菌LAMP方法的建立及初步应用张永德冯世文李军摘要：为快速准确地检测鱼类海豚链球菌（Streptococcusiniae），减少由其造成的经济损失，建立了一种基于Sim基因高效、敏感的海豚链球菌环介导等温扩增（LAMP）检测技术，并对739個样品进行了检测。结果表明，该方法可以特异性地检测海豚链球菌，而不能检测无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）、副乳房链球菌（Streptococcusparauberis）、停乳链球菌（Streptococcusdysgalactiae）等8种参考菌株。对海豚链球菌DNA最低检测限为5.32拷贝/μL；对739个样品的检测结果显示，8种鱼类海豚链球菌的平均检出率为17.67%，池塘水和海水的检出率分别为13.33%、16.67%；该菌主要发现于罗非鱼脑组织中，其平均检出率为27.04%（43/159），而其他鱼类则主要发现于皮肤，平均检出率为24.14%（42/174）；阳性样品主要来自于2014年6月至9月期间，占总检出率的65.00%。关键词：海豚链球菌（Streptococcusiniae）；链球菌病；环介导等温扩增技术；罗非鱼：S852.61：A：0439-8114（2018）15-0099-06DOI：10.14088/jki.issn0439-8114.2018.15.025开放科学（资源服务）标识码（OSID）：DevelopmentandPreliminaryApplicationofLoop-mediatedIsothermalAmplification（LAMP）MethodforRapidDetectionofStreptococcusiniaeZHANGYong-de1，FENGShi-wen2，LIJun2，PENGHao2，LIANGWan-wen1，YUYan-ling1，LIMing1，YANGXue-ming1，ZHU激a-激e1，LUOHong-lin1，CHENFu-yan1，LEIAi-ying1（1.GuangxiKeyLaboratoryforAquaticGeneticBreedingandHealthyAquaculture/GuangxiAcademyofFisherySciences，Nanning530021，China；2.GuangxiVeterinaryResearchInstitute/GuangxiKeyLaboratoryofVeterinaryBiotechnology，Nanning530001，China）Abstract：TodeveloparapidandaccuratemethodfordetectingStreptococcusiniaeandlimitthelossesbecauseofthisdisease，aloop-mediatedisothermalamplification（LAMP）assaywasestablishedwithfourspecificprimersdesignedaccordingtotheSimgeneofStreptococcusiniaeinGenBank，andtotally739sampleswerecollectedanddetectedbyLAMP.TheresultsshowedthattheLAMPhadahighsensitivityforS.iniaewithdetectionlimitsof5.32copies/μLS.iniaeDNA.TheLAMPmethodhadastrongspecificity，whichcanbespecificallyamplifiedS.iniae，andnoamplificationswereobservedinthe8referencestrains.Thedetectionresultsof739samplesshowedthattheaveragedetectionrateofS.iniaeinthesamplesfrom8speciesofculturedfishwas17.67%，while13.33%and16.67%werefrompondwaterandseawater，respectively.Thebacteriawerefoundmainlyintilapiabraintissues，andtheaveragepositivedetectionratewas27.04%，whileinotherfishes，theaveragepositivedetectionratewas24.14%.HigherS.iniaepositivecarryingrateduringJuntoSep，2014wasfoundcomparingtoJantoMayandOcttoDec，2014，withthedetectionratereachedto65.00%.Keywords：Streptococcusiniae；streptococcosis；loop-mediatedisothermalamplification（LAMP）；tilapia链球菌病是一种细菌性疾病，对多种鱼类如亚洲石斑鱼、鲈鱼、银鲳、日本比目鱼、红鼓鱼和罗非鱼等造成严重的影响[1-3]。据估计，全球鱼类每年由链球菌造成的经济损失约2.5亿美元。目前，发现可引起鱼类链球菌病的链球菌亚种主要有无乳链球菌（Streptococcusagalactiae）、海豚链球菌（Streptococcusiniae）、副乳房链球菌（Streptococcusparauberis）和停乳链球菌（Streptococcusdysgalactiae），其中，海豚链球菌和无乳链球菌已成为鱼类，特别是罗非鱼链球菌病的主要病原[4-6]。在中国，2001—2006年罗非鱼链球菌病只是个别养殖场偶发，累计死亡率只有5%～15%。然而从2009年开始，罗非鱼链球菌病大规模爆发，并伴随30%～80%的高死亡率，仅2011年造成的经济损失就高达约4亿美元。尽管海豚链球菌和无乳链球菌都可引起罗非鱼链球菌病，但其优势菌群可能在不同的时期会改变。Chen等[7]发现，中国2006和2007年流行的主要菌...