忍冬干叶基因组DNA提取方法探究摘要：目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRl完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。关键词：忍冬干叶；DNA提取；改良CTAB法中图分类号：R282文献标识码：A文章编号：1673-7717(2008)03-0496-03AStudyonMethodsforExtractionofGenomicDNAfromLoniceraJaponicaThunb・DryLeavesWANGTingl,ZHOUFeng-qinl,LIJial,ZHANGYong-qingl,GUOQing-meil,XIAYang2,LIYan-yan2,YANLi-ping2(1.CollegeofPharmacy,ShandongUniversityofChineseMedicine,Jinem250014,Shandong,China；2.ShandongAcademyofForestryScience,Jinan---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---250014,Shandong,China)AbstTact：Objective：ToextracthighqualitygenomicDNAfromLoniceraJaponicaThunb.drybudswithsilicagel.Methods：Twodifferentmethods,conventionalCTABmethodandmodifiedCTABmethod,wereappliedtoisolategenomicDNAfromdryleavesofLoniceraJaponicaThunb.TheDNAobtainedwasanalyzedbythemeansofagarosegelelectrophoresis，ultravioletspectrophotometricmethodandenzymaticdigestion.Results：HigherpurityDNAwasobtainedbymodifiedCTABmethodanditcanbedigestedbyrestrietionenzymeEcoRIcompletely.TheDNAextractedfromdrybudshadnoobviousdifferenceswiththeDNAfromfreshbudsinqualityandgothigheryield・Conclusion：ThemodifiedCTABmethodwassuitablefortheextractionofgenomicDNAfromLoniceraJaponicaThunb.dryleaves・Keywords：LoniceraJaponicaThunb.dryleaves；DNAextraction；modifiedCTABmethod金银花为忍冬科植物忍冬LoniceraJaponicaThunb.的干燥花蕾或带初开的花［1］。山东是金银花的重要道地产区,长期的自然选择与人工选择，忍冬的种质发生了明显的---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---变异与分化，形成了很多农家品种或品系［2］。为了综合评价忍冬的种质资源，有必要在分子水平上对其遗传多样性进行分析，而基因组DNA的成功抽提是进行任何分子生物学研究的前提。常用的植物DNA提取材料是新鲜幼嫩叶片，然而受取样时间、交通运输条件等的限制，鲜叶往往得不到较好的保存，严重影响了所提DNA质量和下游操作。文献报道［3-6］用变色硅胶快速干燥法保存的材料提取DNA效果较好，且采样方便，样品可长期保存。因此，笔者在进行忍冬种质评价的AFLP分析时，以变色硅胶干燥叶片为材料，进行基因组DNA提取方法的研究，摸索出了适合忍冬干叶的DNA提取方法，从而为后续的采样工作和DNA模板的制备奠定了良好的基础。1材料与方法1.1材料1.1.1实验材料于2006年10月取自山东平邑，经山东中医药大学周凤琴教授鉴定为忍冬科植物忍冬LoniceraJaponicaThunb.o取新鲜完整叶片按文献［7］方法用变色硅胶脱水干燥，同时取枝条抒插，用其萌发的幼叶作对照。1.1.2试剂琼脂糖(Biowest)；CTAB(Sangon)；EDTA、Tris(济南朋远生物技术有限公司)；B-硫基乙醇(济南爱博经贸有限公司)；PVP-40(北京欣经科生物技术公司)；EcoRI,DNAMarkerDL2000,X-Hindllldigest---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---(TaKaRa)；其余试剂均为国产分析纯。STE核分离缓冲液：100mmol/LTris-HCl(pH8.0),50mmol/LEDTA(pH8.0),700mmol/LNaCl,2%PVP(w/v),2%B-蔬基乙醇(v/v)o2XCTAB提取缓冲液:2%(w/v)CTAB,100mmol/LTris-HCl(pH&0),20mmol/LEDTA(pH8.0),1.4mol/LNaCl,5%PVP(w/v),2%-蔬基乙醇(v/v)o10%CTAB溶液：10%(w/v)CTAB，0.7mol/LNaCloTE缓冲液：10mmol/LTris-HCl(pH8.0),lmmol/LEDTA(pH8.0)。1.1.3仪器Allegra^TM21RCentrifuge高速冷冻离心机(BECKMANCOU...