柚昔酶活力测定方法的研究龙俊敏（江西生物科技职业学院动科系，江西南昌330020）摘要:研究在不同胯活测定条件下，黑曲瑶3-9液体摇瓶培养产柚昔胯的最佳测定条件组合。通过1纬（3・）正交实验表明:在水解温度40乜一缩二乙二醇（CMQJ的加量为5mL,显色时间5min的条件组合下嗨活力最高,达到了1068.7U/rnLo关键词：黑曲略3-9；柚苔•酶;柚皮#分类号:S666:Q946.5文献标识码：A:1006-2505（2012X）3-0028-030前言柑枯类水杲包括柠檬、脐橙柚、制萄柚等，是世界上放主要的亚热带水果之一。柑桔的果实中含有多种营养成分，除含有丰富的衞萄糖、果糖等,还含有一定量的硫胺素、核黄素、生物类黄酮、类胡萝卜素等生理活性物质，因此开展柑桔加工和综合利用，很有必要叫但是柑桔加工过程中会出现明显苦味，使许多消费者难以接受，这就限制了其住食品工业中的广泛应用。柑桔中苦味物质主要是柚皮甘和柠椽苦索，其中柚皮昔含量较大,如无核桔汁柚皮昔含量达到30mg/kg左右比柚皮昔（Naringin）,分子式C27H32O14,分子量为580.53。图1为柚皮芹的结构式。消除桔子汁的苦味，目前主要应用的有酶法、吸附法、超临界流体萃取脱苦和代谢脱苦法等現其中酶法脱苦具有专一性强,对桔子汁的营养成分无破坏、效果好、成本低等优点，是冃前较为理想的方法。微生物中能分解柚皮甘的菌种很多，其中以曲囊属为主。柚甘酶可以分解柚皮IE柚仔酶由鼠李糖酶和黄酮类葡萄糖伴酶组成，它能使柚皮廿经过柚皮素-匍萄糖昔中间产物最终水解生成柚皮素，因此此酶可以广泛应用于桔子汁、桔子酒、桔子皮等的脱苦。1材料与方法1.1材料1.1.1菌种。黑曲霉3-9,江西农业大学生物技术研究中心自行分离筛选获得。1.1.2斜面培养基\选择性分离平板培养基（％）。Mg-SO4・7比0,0.5;桔皮粉，0.5；K2HPO4,0.5;KC1,0.5;FeS-04-5H20,0.01；琼脂,2.0；pH值自然。1.1.3液体摇瓶发酵培养基配方（％）。桔皮粉，1;豆渣（湿）,5;黄豆粉，2;蔗糖,0J;CaCl2,0.1;ZnSO4,0.1;K2HPO4QI；MgS04-7H20,0.1；自来水,100；pH值6.5O1.1.4主要试剂。①柚皮昔，含量98%,陕西慧科植物开发有限公创提供;②一缩二乙二醇;冰醋酸,醋酸钠，氢氧化钠等（均为分析纯）;③桔皮粉、豆饼粉、含水量约40%的豆渣（自制）。1.1.5主要仪器设备与玻璃器皿。①仪器设备：722分光光度计、摇床、离心机、超净工作台、培养箱、灭菌锅;②玻璃器皿:20mL带塞试管、平皿、容量瓶、移液管。1.2方法1.2.1菌种的斜面培养。将供试菌株接种到斜面培养基上，培养，备用。1.2.2摇瓶培养基的制备。按供试配方称料，加入所需水的体积，隔水煮沸后维持20min,搅拌均匀分装于250mL三角瓶，每瓶30mL,绒布塞瓶口，并用牛皮纸包扎，121弋消毒30min,备用。H2CO0H图1柚皮昔的结构式收稿日期：2012-02-27作者简介：龙俊敏•女，本科，助教•主要从事生物技术的教学和研究工作。E-mail:iongjunminl116@163•28•1.2.3接种摇瓶发酵。按摇瓶设计要求,每支供试斜面用接种铲接2个三角瓶，包扎好后匕摇床,30七,200转/min培养4~5d,发酵液过滤,测定滤液中柚幵酶活力。1.2.4酶活测定的原始方法1.2.4.1相关溶液的配制。①0.2mol/LpH4.0酷酸缓冲溶液的配制叫首先分别配好溶液A和溶液B;溶液A,0.2mol/L冰醋酸(11.5mL冰醋酸于1000mL容G瓶中，用蒸倔水定容至1000mL即成；溶液B,0.2mol/L醋酸钠，称取醋酸钠（CHjCOONa1.64g或CHCOONa-3H2O2.72g）,用蒸懈水定容在100mL容啟瓶中即成。其次，分别将溶液A41.0mL和溶液B9.8mL加于100mL同一容星瓶中，用蒸憎水定容至100mL即成。②400|ig/mL柚皮昔标准溶液的配制：称取含量98%的柚皮伴40.82mg于100mL烧杯中，用少量0.2mol/L醋酸缓冲溶液溶解后，倒入100mL容量瓶中，再用少量0.2mol/L醋酸缓冲液冲洗烧杯,一并倒入容量瓶中•然后用0.2mol/L醋酸缓冲液定容至100mL,即成400pig/mL的柚皮昔标准溶液。③4.0mol^NaOH溶液的配制：准确称取氢氧化钠分析纯16.0g,用蒸懈水定容至100mL的容量瓶中，即成。1.2.4.2标准曲线的测定3】。柚皮昔含量的测定:采用中林改良Davis法和萃取中林改良Davis法冋。不同浓度柚皮莒标准溶液的配制及测定，见表1。表1中用0,40,120,200,280,360,440共7个不同含量的柚皮昔...