分子生物学方法在食品微生物检测中的应用刘雨潇,刘士敏,王民,于瑞敏,胡冰冰北京军区疾病控制中心,北京100042[摘要]近年来,食品安全受到广泛关注。及时、准确地检测出食品中的病原微生物是食品安全检测的重要内容,食品病原微生物的分子生物学检测技术因其特异性和灵敏性而备受瞩目。我们主要介绍了基因探针检测法、PCR检测法和基因芯片检测法的原理、开发及其在食品微生物检测中的应用。[关键词]食品微生物检测;基因探针;PCR技术;基因芯片[中图分类号]Q789[文献标识码]A[文章编号]1009-0002(200901-0451-04ApplicationofMolecularBiologyMethodsinFoodMicrobiologicalDetectionLIUYu-Xiao,LIUShi-Min,WANGMin,YURui-Min,HUBing-BingCenterforDiseaseControlofBeijingMilitaryRegion,Beijing100042,China[Abstract]Recently,foodsafetyhasgotmoreandmoreattention.Rapidandaccuratedetectionofpathogenicmicroor-ganisminfoodisanimportantpartoffoodsafetydetection.Nowadays,molecularbiologymethodsareoutstandingbecausetheyhavetheadvantagesonspecificityandsensitivity.Inthisarticleweintroducedtheprinciple,developmentandappli-cationin---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---foodmicrobiologicaldetectionofthreecommonmolecularbiologymethods,geneprobe,PCRandgenechip.[Keywords]foodmicrobiologicaldetection;geneprobe;PCR;genechip综述doi:10.3969/j.issn.1009-0002.2009.02.041食品安全性要求食品中不应含有可能损害或威胁人体的物质或因素,它关系到人体健康和社会稳定。随着世界经济全球化、贸易自由化和食品国际贸易的迅速发展,食品安全已成为事关人民健康和构建和谐社会的重大战略问题,及时、安全、准确地检测出食品中的病原微生物是食品安全检测的重要内容。传统的病原微生物检测方法步骤繁多、效率低下,且难以检测生长缓慢或新型的病原微生物。因此,人们期待更加快速、准确的检测方法。近年来,基因探针检测法、PCR检测法和基因芯片检测法等分子生物学方法因其检测的特异性和灵敏性而备受瞩目,成为食品安全监督的有力工具。1基因探针检测方法基因探针技术又称核酸分子杂交技术,该技术发明于1968年,由华盛顿卡内基学院的Britten等共同创建。它是分子生物学中DNA分析方法的基础,也是当今分子生物学技术中应用最为广泛的一种。基因探针是带有标记的基因特异片段。基因探针检测技术主要利用碱基配对原理,使互补的2条核酸单链通过退火形成双链。近年来基因探针技术已被广泛应用于食品微生物的检测中,可灵敏、快速、直接地检测出致病性微生物,不受非致病性微生物的影响[1-3]。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---每一种病原体都有独特的核酸片段,通过分离和标记这些片段就可制备出探针,利用带有标记物的已知序列的核酸探针,与待测样品进行杂交,如样品中含有特定病原体,探针将与目的核酸序列特异结合,最后使用特定的方法测定标记物,便可确定样品中有无特定病原体。基因探针检测技术不仅具有特异性、灵敏度高的优点,而且兼备组织化学染色的可见性和定位性。核酸探针技术主要用于食品中致病性病原菌的检测。目前,国内外研究者已开发出多种基因探针用于食品微生物的检测。Moseley等以生物素标记的沙门菌基因片段作为探针,对食品中的沙门菌进行了检测,效果良好效果。Kerdahi等[4]使用自动化酶连接的非放射性DNA探针,迅速准确地检测出了单核细胞增生李斯特菌。陈倩等[5]使用针对ESIEC大肠杆菌HPI毒力岛基因设计的rp-z探针,成功地鉴定出了ESIEC大肠杆菌。此外,已有多种商品化的基因探针试剂盒出品。美国GENE-TRAK公司研制出了脱氧核糖核酸杂交筛选比色法,主要利用特异的基因探针对沙门菌、李斯特菌和大肠杆菌的rRNA进行检测[6]。检测步骤如下:首先设计与细菌rRNA互补的基因探针;待检样品经过增菌培养后,溶解细菌,并加入带有标记的探针进行液相杂交;如果待检样品中存在靶细菌rRNA,荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸(polydA末端捕获探针将与目标rRNA序列杂交;此后,把包被多聚脱...