SSR鉴定水稻两系杂交种纯度应用及探析II.不同苗龄取样方法对室内纯度结果影响摘要：以水稻(OryzasativaL.)两优17为试验材料进行标准发芽后，对幼苗进行大苗、小苗分类，并利用SSR引物分别对其进行室内纯度鉴定。鉴定结果表明，苗的大小对鉴定结果的影响较大，小苗与大苗的纯度相差2.8个百分点，超出了允许的误差范围。与大田相比，大苗的纯度更接近于田间秧苗纯度。在田间小苗往往不能成苗，不影响大田纯度，故小苗是造成室内与大田纯度鉴定结果产生差异的重要原因之一。关键词：水稻(OryzasativaL.);SSR:室内；田间；纯度鉴定：Q789;S511文献标识码：A文章编号：0439-8114(2012)仃・3687-02StudyonDetectionofSeedPurityofTwo-IineHybridRicebySimpleSequeneeRepeat(SSR)II・EffectsofSamplingMethodsonLaboratoryPurityDetection3・Coll434025,Hubei,China)LIAOFang・Ii1,ZHANGYu-fei1,LINMei1,ZHAOHongl,XIONGXian-feng1,TUShu-xin2,ZHANGKai3(1.SeedAdministrationBureauof激ngzhou,Jingzhou434020,Hubei,China;2.HuazhongAgriculturalUniversiWuhan430070,China;egeofAgricuItuUniversity,激ngct:SeedIingsofwereobtainedftandardgerminationandcIssifiedaslargeorsmallseedIings.TheIaboratoryseedpuritywastestedbySSR・TheresuItsshowedthatthesizeofseedIingshadobviouseffectonidentificationofpurityasthediffereneebetweenlargeandsmaIIseedIingwas2.8%,whichexceedtheaIIowabIeerrorrange.ThepurityoflargeseedIingwassimiIarwiththatoffieId.MeanwhiIe,thesmaIIseedlingshadlimitedeffectonthepurityoffieldastheycouldnotmaturethuswasthekeyfactorcontributetothediffereneebetweenseedspurityinlaboratoryandfieId・Keywords:rice(OryzasativaL・)；SSR;indoor,field;pL.）的种子发芽率和成秧率是两个概念，前者表示在规定条件和时间内长成的正常幼苗占供检种子数的百分率，后者表示百个芽苗大田形成正常植株的株数。前人用SSR标记检测种子纯度时，用于提取DNA的材料大多来自两个途径[10],一是在田间植株上直接剪取叶片，二是在发芽箱内培养幼苗。第一种方法由于省去了种子样品发芽、成秧等环节，其结果与原样品实际纯度有所差异；第二种方法由于发芽箱条件往往设定为种子的最适发芽环境，很多在田间不能成苗的种子在室内可以长成弱苗或残苗，在取样时，根据操作规程，这类小苗都被当成鉴定对象进行了检测。这一批在大田有可能不能成秧的幼苗是否会影响到室内鉴定结果与大田生产中实际纯度的吻合性，目前尚未见报道。本试验模拟田间成秧率取样,探索DNA模板制备前，按室内标准发芽方法获得的大苗、小苗对种子纯度鉴定结果的影响，从而寻求减少或修正利用SSR引物鉴定室内与田间纯度之间误差的途径。1材料与方法11材料所用杂交水稻品种两优17及其亲本均由湖北省种子管理局统一提供。水稻(Oryzasativa所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。1・2PCR反应体系PCR扩增反应总体积10pL:1Oxbuffer1pL,10mmol/LdNTP0.2pL,50ng/pLprimer0.2pL+0.2pL,2U/pTaq酶0.6pL,25ng/pLDNA1pL,ddH2O6・8pL。PCR扩增程序：94°C预变性4min;949变性15s,559退火15s,729延伸30s,35个循环；729下延伸7mino扩增产物在浓度为3%、含EB的琼脂糖凝胶中进行电泳后应用凝胶成像系统观察记录。1.3DNA模板制备和引物筛选DNA模板的制备采用农业部推荐的简易提取DNA法。采用10个单株幼苗抽提的DNA混合物做模板，以消除杂株可能对筛选结果的干扰，然后用农业部推荐的44对两系杂交种常用SSR引物分别对两优17及其父母本DNA进行扩增，扩增产物在含EB的3%的琼脂糖凝胶电泳后成像观察。从中筛选出多态性高、共显性强、谱带清晰、杂株检出率高的引物RM21鉴定两优17O1.4室内大苗和小苗的分类及纯度鉴定从两优17中随机抽取900粒种子，按GB/T3543.4—1995进行发芽试验。发芽两周后按苗高分成两类：小苗S3cm,大苗＞3cm。将这两类苗分别用RM21引物进行纯度鉴定。