口蹄疫病毒自然感染和疫苗接种动物鉴别方法研究进展任林柱口，王兴龙2,崔丽瑾】（1.吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062；2.中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，吉林长春130062）中图分类号：S855.3文献标识码：A口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的一种急性、热性、高度接触性传染病，世界动物卫生组织（0IE）将该病列为listeddisease（2006年版），大多数亚洲、非洲、南美洲国家一直都通过注射灭活疫苗的办法来控制该病的流行。但自从2001年英国暴发口蹄疫后，欧盟允许在暴发口蹄疫时进行疫苗的紧急接种；而口幡疫病毒感染易感动物后，能形成持续感染，虽然不显示临床症状但体内有活病毒存在。因此，区分口蹄疫疫苗免疫动物和自然感染动物（DIVA）成为口蹄疫诊断的另一项重要内容，这项工作的准确开展能反映一个地区或畜群中口蹄疫病毒的感染状态，在活畜调运和疫情调查时尤为重要，鉴别自然感染和免疫动物也是O1E判定一个国家或地区有无口蹄疫的依据。1FMDV非结构蛋白的应用用病毒感染相关抗原（VIAA）的免疫扩散技术和病毒分离技术区分免疫动物和自然感染康复动物.曾一度被公认为是一种可靠的方法。但在应用过程中发现，VIAA抗体检测和病毒分离的结果有时不一致。而且VIAA抗体阳性的动物不足以说明已受感染，这是因为VIAA存在于疫苗当中，并且是疫苗的有效成分之一，动物接种未纯化的疫苗或反复接种疫苗，VIAA抗体就呈阳性:卜幻。之后，放射免疫沉淀技术、原核表达的3D蛋白酶联免疫电转移斑点技术、大肠杆菌表达的FMDV2C、3AB、3ABC、3D非结构蛋白以及自然的非结构蛋白ELISA技术相继问世「2"。Lubroth等⑶认为2C和3ABC都吸附在细胞膜上，因此，纯化的疫苗中不存在能产生抗体的2C和3ABC。Sorensen等⑴认为3DELISA能与免疫和感染动物的血清反应，3AB和3ABCELISA能区分免疫动物和感染动物。2004年，Moonena【5】发现，基于FMDVNS蛋白建立的ELISA方法是目前检测和鉴别注苗动物收稿=200708-28基金项目：军#医学科学院科技创新基金资助项目；吉林省科技厅科技发展计划顼日（20050549）作者简介：任林柱（1978-）,男.讲师，博土.研究方向为分子生物学及分子免疫学通讯作者：王兴龙•E-mail：rodgeren2006⑥yahoo,com.cn文章编号：0529-6005（2008）12-0055-02群体中带毒动物的最灵敏的方法。上述各家的结果虽不尽一致，但总的趋向是基于3D的方法检测免疫和感染动物的结果大多呈阳性，检测2C.3ABC抗体能够反映动物群的病毒感染水平，几种非结构蛋白同时使用能提高检测结果的准确性。1997年Diego：。」以大肠杆菌表达的非结构蛋白FMDV3ABC作为抗原，建立了间接ELISA鉴别口蹄疫病毒感染的方法。并检测了137份感染动物血清，阳性率为100%;检测了疫苗接种1次的动物血清228份，有225份为阴性；接种多次动物的血清159份，几乎全部为阴性，阴性率为99%。检测了444份未接种的健康动物血清442份为阴性，特异性为99.5%。1997年阿根廷的Silberstein^用大肠杆菌及昆虫细胞表达的重组非结构蛋白3AB1作为抗原，建立了检测抗3AB1抗体的ELISA法，ELISA和Westernblot分析均表明，重组的3AB1蛋白可以与FMDV感染动物的血清反应，而不能与疫苗接种动物的血清反应。用此重组蛋白ELISA法可以检测到感染后7-560d的动物血清中的FMDV。2005年，其同事NanniM⑹以原核生物表达的3AB1蛋白为抗原，建立间接ELISA鉴别口蹄疫病毒感染动物与疫苗免疫动物的方法，利用该法检测了118份试验性感染动物的血清，阳性率为97.5%。对109份未免疫正常血清，阴性率100%。102份免疫1次动物的血清和30份免疫2次的血清，利用上述试剂检测的结果均为阴性。2000年Bergmann⑴分析了FMDV重组抗原3A,3B,2C,3D和3ABC在I-ELISA（indirectenzyme-linkedimmunosorbentassay）检测中的特异性，发现I-ELISA-3ABC法可以用于FMDV流行监测，并可很好地区分感染动物和免疫动物。2005年,SorensenC10］建立了区别FMDV感染动物和免疫动物的液相阻断ELISE法，并证明液相阻断ELISE-3ABC法可以作为控制和根除FMD的理想方法。Armstrong0"也得出同样的结论。Iakovleva^用大肠杆菌表达了FMDV3A.3B和3AB重组蛋白，并将其作为F...