4种中药散剂微生物限度检查方法验证汤为民陈清华张雪琴王艳秋（江苏七0七天然制药有限公司212002）【摘要】目的建立4种中药散剂微生物限度检查方法。方法通过接种阳性菌回收率试验测定珠黄散、锡类散、冰硼散、如意金黄散4种中药散剂是否含抑菌成分。结果如意金黄散供试品试验菌的回收率大于70%,证明无抑菌作用；珠黄散、冰硼散、锡类散有一定的抑菌作用，但可以通过稀释法消除抑菌作用。结论如意金黄散可以按平皿法进行微生物限度检查；珠黄散、冰硼散、锡类散可以按培养基稀释法进行微生物限度检查。【关键词】微生物限度检查散剂抑菌作用方法验证【】R927.1【文献标识码】A【】2095-1752（2013）20-0038-022010年版《中国药典》收载的各中成药品种检查项下，很少规定具体的微生物限度检查方法。微生物限度检查方法必须经过验证试验，含抑菌活性的中成药的微生物限度检查，必须消除供试液抑菌活性后，再根据中国药典规定的方法进行检查。木文锡类散、珠黄散等4种中药散剂建立了微生物限度检查法，以为同行提供一些借鉴。1仪器与材料1.1仪器细菌培养箱（型号：250-L）常州国华仪器有限公司，霉菌培养箱（型号：Mj-250BS-ll）上海新苗医疗器械制造有限公司，立式压力蒸汽灭菌器（型号：LDZX-50FBS）上海中安医疗器械厂。1.2样品锡类散｛批号:121001、121002、121003）、珠黄散（批号：121101、121102、121103）、冰硼散（批号：120801、120802、120803）、如意金黄散（批号:121201、121202、121203），生产单位：江苏七0七天然制药有限公同；1.3试验及培养基pH为7.0的氯化钠一蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养陶汤培养基、胆盐乳糖培养基、胆盐乳糖发酵管培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、4一甲基伞形酮葡糖苷酸培养基、曙红亚甲蓝琼脂培养基均由中国生物制品检定研宄院提供。1.4菌种大肠埃希菌【CMCC(B)44102】、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌【CMCC⑻26003】、乙型副伤寒沙门菌【CMCC(B)50094】、白色念珠菌［CMCC(F)9800l］黑曲霉［CMCC(B)98003］均为江苏省食品药品检验所提供。2方法与结果2.1閑液制备(1)接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，置30〜35°C培养24小吋，分别取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每1ml含菌数50〜lOOcfu的菌悬液。(2)接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，置23〜28°C培养48小吋，取上述培养物1ml加9ml0.9%的无菌氯化钠溶液10倍递增稀释制成每lml含菌数为50〜lOOcfu的菌悬液。(3)接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中，置23〜28°C培养7天，使大量孢子的形成。用5ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%的无菌氯化钠溶液将孢子洗脱并过滤孢子悬液至无菌试管内，取lml加9ml0.05%(ml/ml)聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液制成每lml含孢子数为50〜lOOcfu的孢子悬液。2.2供试液的制备称取各样品10g,分别加入pH7.0无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液至100ml。制成1:10均匀的供试液。2.3试验方法平皿法为取1:10的供试液ImL注皿。培养基稀释法为取I:10的供试液ImL注入2个平皿（0.5mL/皿）或取I:10的供试液ImL注入5个平皿（0.2mL/皿）。2.3.1冋收率试验试验组取样品10go用pH为7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液稀释至100ml,使成溶解均匀的1:10的供试液，取lml注入平皿中，再分别取各试验菌50-100cfu注入同一平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度下，细菌培养24—48h,白色念珠菌和黑曲霉培养48-72h。菌液组取试验菌50-100cfu注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度下，细菌培养24-48h,闩色念珠菌和黑曲霉培养48-72h,测定所加入的试验菌数，平行制备2个平皿。供试品对照组取样品10g，用pH为7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液稀释至100ml,使成溶解均匀的1:10的供试液，立即倾注琼脂培养基，待凝固后，置规定温度下，细菌培养24-48h,白色念珠菌和黑曲霉培养48-72h，测定供试品本底菌数。稀释剂对照组取pH为7.0的无菌氯化钠一蛋白胨缓冲液ImL和试验菌50-lOOcfu，分别注入同一平皿中，考察稀释剂...