网络出版时间:2013-02-2609:47网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/22.1197.Q.20130226.0947.028.html中国生物制品学杂志2013年2月第26卷第2期ChinJBiologicalFebruary2013,Vol.26No.2•技术方法•新城疫病毒一步法RT-PCR检测方法的建立及初步应用梁瑾，程福亮，陈甜甜，宿志瑞，范群平山东宝来利来生物工程股份有限公司，山东泰安271000摘要：目的建立新城疫病Newcastlediseasevirus,NDV)—步法RT-PCR检测方法，并进行验证及初步应用。方法根据NDVF基因序列，设计合成了1对特界性引物，建立一步法RT-PCR检测方法,并验证其特异性及敏感性；应用建立的方法对23份疑似新城疫(Newcastledisease,ND)病料进行检测，并与血凝及血凝抑制试验检测结果进行比对。结果建立的一步法RT-PCR同时检测NDV、传染性法氏囊病病毒(Infectiousbursaldiseasevirus,IBDV)和禽流感病Avianinfluenzavirus,AlV)H9亚型，仅NDV为阳性JBDV和AIVH9均为阴性;该方法最低可检出约4pg的NDVRNA；23份疑似ND病料,一步法RT-PCR检出11份阳性，血凝及血凝抑制试验检出13份阳性，两种方法的阳性符合率为85%O结论建立了NDV—•步法RT-PCR检测方法,该方法特异性好，敏感度较高，用时较短，可从分子水平上对NDV进行早期快速诊断和流行病学调査。关键词：新城疫病毒;逆转录聚合酶链反应中图分类号：S851.34+7.2R392-33文献标识码：A文章编号：1004-5503(2013)02-0265-03DevelopmentandpreliminaryapplicationofonestepRT-PCRassayforNewcastlediseasevirusLIANGJin,CHENGFu-liang,CHENTian-tian,SUZhi-nii,FANQun-pingShandongBoly-lelyBioengineeringCooperation,Tai'an271000.ShandongProvince,ChinaCorrespondingauthor:CHENGFu-lian^:cjl_0428@yahoo・com.cnAbstract:ObjectiveTodevelopaone-stepRT-PCRassayforNewcastlediseasevinis(M)V).MethodsApairofspecificprimerswasdesignedaccordingtothesequencesofFgeneofNDV,basedonwhichaonestepRT-PCRassaywasdevelopedandverifiedforspecificityandsensitivity・Twenty-threeclinicsuspectedsamplesweredetectedbythedevelopedRT-PCRmethod,ofwhichtheresultswerecomparedwiththosebyhemagglutination(HA)andhemagglutinationinhibilion(Hl)tests.ResultsBydevelopedRT-PCRmethod,thedetectionresultofNDVwaspositive,whilethoseofinfectiousbursaldiseasevirus(IBDV)andavianinfluenzavirus(AIV)subtype119werenegative・Theminimumdetectionlimitofthemethodwas4pgNDVRNA・Ofthe23clinicsuspectedsamples,11werejudgedaspositivebyKrf-PCR.and13byHAandHItests,indicatingapositivecoincidencerateof85%.ConclusionOne-stepRT-PCRassayforNDVwasdeveloped,whichwasspecific,sensitiveandtime-saving,andmightbeusedforearlyrapiddiagnosisandepidemiologicalinvestigationofNDVatmolecularlevel.Keywords：Newcastlediseasevirus(NDV);Reversetranscription-polymerasechainreaction(RT-PCR)---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---•265•---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---新城疫(Newcastledisease,ND)是由新城疫病毒(Newcastlediseasevirus,NOV)引起的一种禽类急性败血性传染病，由于该病发病急，致死率高,被国际兽医局列为A类烈性传染病〔)］。目前对丁ND的诊断,除了采用经典的病毒分离利鉴定外，还冇血凝和血凝抑制试验、病毒中和试验.ELISA试验.RT-PCR等，其中RT-PCR是目前研究最多，进展最快的技术。采用RT-PCR法检测病毒具冇快速、灵敏、特异、肓观通讯作者:程福亮,E-mail：cll_0428@yahoo.coin.cn等特点，避免了常规血清学诊断方法中罪特异性因素的干扰及敏感性低等问题，可以直观地从分子生物学水平检测到病毒核酸，目前已成为临床上检测和疾病诊断的一个重要发展方向口心。NDV基因组由NP、P、M、F、HN、L6种基因组成，其中F基因是病毒毒力强弱和免疫原性等的主要决定因素之一。木实验根据NDVF基因设计了一对特异性引物，建立NDV一步法RT-PCR检测方法,并进行验证及初步应用,为我国ND的血清学和流行---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---
