不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA.中国组织工程研究第18卷第51期2014–12–10出版ChineseJournalofTissueEngineeringResearchDecember10,2014Vol.18,No.51ISSN2095-4344CN21-1581/RCODEN:ZLKHAH8201wwCRTER.org孙志涛，男，1978年生，安徽省淮南市人，汉族，2013年广州中医药大学毕业，博士，主要从事脊柱、髋膝关节退行性变研究。doi:10.3969/j.issn.2095-4344.2014.51.001[wwsodocs/doc/74f230ed3868011ca300a6c30c2259010302f3f2]:R318文献标识码:A:2095-4344(2014)51-08201-05稿件接受：2014-10-29SunZhi-tao,M.D.,ShenzhenHospitalofTraditionalChineseMedicine,Shenzhen518000,GuangdongProvince,ChinaAccepted:2014-10-29不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA孙志涛1，牛维2，何升华1，林定坤2(1深圳市中医院，广东省深圳市518000；2广东省中医院骨三科，广东省广州市510120)文章亮点：1目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法，常见的有RneasyLipidTissueKit、RNAout试剂盒和经典Trizol法，国内文献报道多为经典Trizol法。作者在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要，为了解决这个瓶颈，作者尝试了各种方法。2比较目前文献报道的常见3种不同方法提取的软骨组织RNA，结果显示RneasyLipidTissueKit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好，并能成功反转录合成双链cDNA。关键词：组织构建；软骨组织构建；软骨；RNA提取；大鼠；国家自然科学基金主题词：软骨；RNA；大鼠基金资助：国家自然科学基金项目(81173285)摘要背景：目前文献报道的软骨RNA提取有多钟方法，国内文献报道多为经典Trizol法，在实验中发现该方法提取的RNA并不能满足后续实验的需要。目的：探索不同方法提取SD大鼠软骨组织总RNA的区别。方法：选取3月龄SD大鼠9只，分别采用RneasyLipidTissueKit、RNAout试剂盒和经典Trizol法对软骨组织进行总RNA提取，并通过RNA琼脂糖凝胶电泳检测RNA的完整性，以探寻软骨总RNA最佳提取方案。结果与结论：Trizol法提取的RNAA260/A280值为1.58，说明纯度不高；RNAout法提取的RNA，由于软骨含有大量的蛋白多糖和胶原，也不能满足后续实验的需要；RNeasy?MiniKit法和肝(Trizol)法提取RNA的A260/A280值分别为2.00和1.98，说明提取的总RNA或核酸的纯度高。RNA的完整性电泳结果显示，RNeasy?MiniKit法、RNAout法和肝(Trizol)法可见28s、18s及5s条带，而Trizol法未见任何条带，RNAout法28s和18s条带不清楚。结果提示RneasyLipidTissueKit法获得的总RNA纯度高、完整性和稳定性好，并能成功反转录合成双链cDNA，而RNAout试剂盒和经典Trizol法获得的总RNA不能满足后续实验需要。孙志涛，牛维，何升华，林定坤.不同方法提取SD大鼠膝关节软骨组织的总RNA[J].中国组织工程研究，2014，18(51):8201-8205.DifferentmethodstoextracttotalRNAfromthekneecartilagetissueofSprague-DawleyratsSunZhi-tao1,NiuWei2,HeSheng-hua1,LinDing-kun2(1ShenzhenHospitalofTraditionalChineseMedicine,Shenzhen518000,GuangdongProvince,China;2ThirdDepartmentofOrthopedics,GuangdongHospitalofTraditionalChineseMedicine,Guangzhou510120,GuangdongProvince,China)AbstractBACKGROUND:Currently,therearemanymethodstoextractcartilageRNAreportedintheliterature,andclassicTrizolmethodhasbeenmostlyreportedinChina.However,itisdiscoveredthatRNAextractedbytheTrizolmethodcannotmeettheneedsofthefollow-upexperiments.OBJECTIVE:ToexplorethedifferenceofdifferentmethodstoextracttotalRNAfromthecartilagetissuesofSprague-Dawleyrats.METHODS:NineSprague-Dawleyratsof3monthsoldwereselectedtoextracttotalRNArespectivelybyRneasyLipidTissueKit,RNAoutkitandclassicTrizolmethod.AgarosegelelectrophoresiswasusedtodetectRNAintegrityinordertoexplorethebestextractionschemeoftotalRNA.RESULTSANDCONCLUSION:WhenTrizolmethodwasusedtoextractRNA,theA260/A280valuewas1.58,indicatingthatthepuritywasnothigh.Duetoalargenumberofproteoglycanandcollage...