MDBK(牛肾细胞)细胞培养方法

MDBK(牛肾细胞)细胞培养方法MDBK(牛肾细胞)细胞培养方法传代步骤:弃去旧的生长液-->用无钙镁水(CMF)冲洗贴壁细胞数次(视细胞瓶的大小,3--5次)-->剩少许CMF,滴入ATV2--3滴-->摇匀细胞瓶中的液体,使ATV均匀的分布到瓶里的没个地方-->放入37度二氧化碳温箱中3--5min消化-->弃去ATV,加入生长液,拍打吸吹下细胞-->镜下观察-->分瓶-->作好记号,放入37度二氧化碳温箱生长细胞特点:该细胞生长力强,而且快速一般24h就可以张到80%,48h不传就会变的很老,所以该细胞传时要勤点;我感觉MDBK还是很好传的,比以前我传的ST、Vero细胞等要好传一些,且不那么容易死亡,所以是我的一个比较好的选择!该细胞适合接种疱疹病毒(如:伪狂犬病毒)!BHK-21:弃除旧的培养液后---用缓冲液冲洗一遍----用0.22%的胰酶消化液消化约两分钟左右可以看到细胞像沙子一样脱落-------赶紧倒掉胰酶加入含10%的牛血清培养液终止消化。但目前国内能找到的BHK-21细胞大部分都有支原体感染,如果是好的BHK-21细胞能做到1比20的分种率。补充一点关于BHK-21的培养,先用少量胰酶冲洗一下,弃去,再用胰酶消化1min左右,效果会好一些皮肤成纤维细胞和THP-1细胞:皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。由于我们实验室养细胞的时间也不是很长,所以也只能说说自己平时的操作了。先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底,也就是细胞与细胞之间没有间隙时,就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液,用D-Hanks液洗两遍,再加入0.25%的胰酶,加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底,然后静置两分钟左右,最好是能在显微镜下观察,当细胞之间出现间隙且有一部分细胞呈现圆形后即可。吸去胰酶,加入含血清培养液,摇晃瓶子使培养液覆盖瓶底就行了。因为血清可以终止胰酶的消化。然后吹打瓶底各处使细胞脱落。再分瓶补加培养液。THP-1细胞的传代就比较简单了。可以有两种传代方法。如果镜下观察细胞状态很好,没有其它杂质即细胞裂解物之类的,就可以采用直接传代法。传代前将细胞培养瓶直立一个半小时使细胞自然下沉。吸弃上层少量培养液约三分之一,将余下的培养液分成两瓶,再分别补加培养液即可。如果镜下观察觉得培养液中有杂质即可采用离心传代法。如果细胞数目较多可以低速离心约600转离心六分钟,细胞可以沉淀下来而且可以去除细胞碎片之类的杂质。如果觉得细胞数目不多比较宝贵,那就提高转速可以1000转离心六分钟,这样细胞损失很少但可能也有些杂质会一起沉淀下来。离心后去除上清液,加入新的培养液吹打浑匀即可分瓶传代了。---本文来源于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---(来源:购自武汉病毒所细胞保存中心由四川农业大学动物生物技术中心繁殖保存)---本文来源于网络,仅供参考,勿照抄,如有侵权请联系删除---

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