微生物与生化药学专业优秀论文两种方法降解的肝素寡糖的制备及其对HUVEC细胞因子分泌的影响关键词：抗血栓药肝素寡糖药物结构生化药理摘要：肝素属于糖胺聚糖（GAGs）类生化药物，是在结构上不均一、在聚合程度上高度分散的一类硫酸多糖，主要由糖醛酸和葡糖胺及其衍生物通过1，4—糖苷键交替连接形成，其主要重复的双糖单位为—α—L—IdoA—2—SO4—（1→4）—α—D—GlcNSO3—6—SO4（又称三硫酸双糖单位），相对平均分子量（Mr）分布范围为3kD～30kD。血栓形成是指在一定条件下，血液有形成分在血管形成栓子，造成血管部分或完全堵塞、相应部位血供障碍的病理过程。按血管种类可分为动脉性、静脉性血栓。血栓栓塞（thromboembolism）是血栓由形成部位脱落，在随血流移动的过程中部分或全部堵塞某些血管，引起相应组织和（或）器官缺血、缺氧、坏死（动脉血栓）及瘀血、水肿（静脉血栓）的病理过程。传统上认为血栓形成和凝血包括内源性和外源性两条途径，其中TF（tissuefactor，TF）是外源性凝血途径的启动因子，TF与因子FⅧ结合形成TF/Ⅶa复合物，激活组织因子途径（也称外源性凝血途径），这个过程一般发生在血管内皮细胞等的表面。同时TF在内源性凝血途径也有作用。组织因子途径抑制物（TFPI）是一新型抗凝蛋白，是目前惟一能抑制TF活性的生理性活性物质；血栓调节蛋白（TM）是位于内皮细胞膜表面的一种糖蛋白，通过与凝血酶结合形成凝血酶—血栓调节蛋白复合物，激活蛋白C发挥抗凝、促纤溶作用，在机体抗凝机制中发挥了重要的作用，TF和TFPI和TM的研究已成为人们探讨凝血机制的新热点，尤其是与如心脑血管疾病等的各种血栓性疾病的关系受到人们的关注。肝素作为抗凝血和血栓性疾病防治药物在临床上的应用已有七十多年的历史，其抗凝作用主要是激活ATⅢ实现的，临床研究表明肝素治疗血栓存在着致出血、减少血小板的副作用，而分子量低的肝素寡糖能降低/消除这些副作用，具有普通肝素不能比拟的巨大优势。肝素寡糖是将肝素降解获得的平均Mr在1kD～4kD的寡糖片段，目前降解肝素的方法主要有物理分离法和化学降解法，其中化学降解法主要有亚硝酸降解法，β—消除降解法等。本研究采用β—消除法和改良的亚硝酸降解法降解未分级肝素制备肝素寡糖，经过Superdex30凝胶柱层析分离获得肝素寡糖的分级分离组分，进行结构测定。在一般药理学基础上，研究了各分级分离组分的肝素寡糖抗FXa活性，并测定各寡糖组分对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌组织因子（TF）、组织因子途径抑制剂（TFPI）、血栓调节蛋白（TM）的影响，从分子水平探讨了肝素寡糖抗血栓活性的分子基础和作用机制。主要研究内容及结果包括：①采用β—消除法和亚硝酸降解法制备肝素寡糖，经过Superdex30凝胶柱层析分离得到不同分级的肝素寡糖组分，透析袋脱盐后，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测纯度，获得相对较纯的四种肝素寡糖NO—1、NO3、NO—4、NO—5、β—3、β—4、β—5、β—6。②采用高效液相法测得各分级分离组分的相对分子量。③运用紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、核磁共振波谱（1H—NMR、13C—NMR）技术确定了β—5、β—6和NO—4、NO—5各肝素寡糖的主要分子结构。④检测各寡糖组分的抗FXa活性。⑤测定各寡糖组分对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌组织因子（TF）、组织因子途径抑制剂（TFPI）、血栓调节蛋白（TM）的影响。研究结果表明：⑴两种方法降解的肝素寡糖对LPS激发的HUVEC细胞内TF增加，均有较强的抑制作用，且分子量越小的组份，抑制作用越明显。⑵两种方法降---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---解的肝素寡糖均可以增强HUVECTFPI的分泌，且分子量越小的组份，增强作用越明显。⑶两种方法降解的肝素寡糖均可以增强HUVEC细胞内TM的表达，不同分子量之间未观察到显著性差异。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---正文内容肝素属于糖胺聚糖（GAGs）类生化药物，是在结构上不均一、在聚合程度上高度分散的一类硫酸多糖，主要由糖醛酸和葡糖胺及其衍生物通过1，4—糖苷键交替连接形成，其主要重复的双糖单位为—α...