分泌抗中国小麦花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用的制作方法分泌抗中国小麦花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用的制作方法本发明公开了一种分泌抗中国小麦花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗的应用。用差速离心的方法提纯的中国小麦花叶病毒病毒粒子为抗原免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、筛选、克隆，获得1株能稳定传代并分泌抗中国小麦花叶病毒特异、灵敏的单克隆抗体的杂交瘤细胞株18A3，其保藏号为CGMCCNo.9337。该杂交瘤细胞分泌的单抗腹水ELISA效价达10-8，抗体类型及亚类为IgG1，kappa链。18A3分泌的单抗与中国小麦花叶病毒有特异性反应，而不与小麦黄花叶病毒、大麦黄花叶病毒、水稻条纹病毒、烟草花叶病毒等反应。该杂交瘤细胞株及其分泌的单抗为该小麦病毒病的诊断、检测及科学防控提供技术和物质支撑。CGMCCNo933720140703【专利说明】分泌抗中国小麦花叶病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用【技术领域】[0001]本发明涉及生物【技术领域】，尤其涉及一种分泌抗中国小麦花叶病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株及其单抗的应用。【背景技术】[0002]中国小麦花叶病是一类由土壤中真菌传播的病毒引起的病害，传播的主要生物媒介是一种习居于土壤中的低等真菌，即禾谷多黏菌(PolymyxagraminisLed.),病原为中国小麦花叶病毒(Chinesewheatmosaicvirus,CWMV),并常与小麦黄花叶病毒(Wheatyellowmosaicvirus,WYMV)复合侵染小麦。这两类病毒都属于真菌传棒状病毒组。在电子显微镜下观察，病毒粒体为直棒状二分体，即具有长、短两种形状，长粒体长约为360纳米，短粒体长约为80纳米，病毒粒体直径约为20纳米。[0003]我国自20世纪70年代发生有禾谷多黏菌传播的大、小麦病毒病以来，目前已有河南、四川、湖北、陕西、山东、江苏、浙江、安徽和上海等9个省发生此类病害，发病面积达200万公顷，每年减产约15亿千克，并且病害尚在蔓延中。造成病害迅速蔓延，危害严重的原因在于传播这类病毒的介体禾谷多黏菌具有厚壁休眠孢子，抗逆性极强，且能在土壤中长期存活，携带的病毒十年后还具有侵染力，不能通过化学方法得以防治。病毒种类和株系复杂，变异快，新病毒致病型和株系不断出现，可以克服抗病品种对这些病害的抗性，从而很难培育优质、高产且具有光谱抗性的大麦和小麦品种。由于这类病害防治困难，已成为一类世界性重要病害。[0004]由中国小麦花叶病毒引起的小麦病害在冬小麦上发生严重。冬季叶片有轻微发紫症状。2月中、下旬气温回升，心叶上开始出现病斑。初始症状为从叶基部向叶尖方向发展的不连续、狭长的褪绿或黄化条纹，随叶片展开，呈不规则的褪绿花叶并逐渐变黄，后期整株黄化。2月下旬至3月上、中旬，麦苗外表症状最为明显，病苗植株矮小、分蘖少、根系发育不良、新生根少、褐色根多。进入5月以后，气温变高，花叶症状逐渐消失，新叶无症状。发病的植株严重矮化、枯萎，成熟后穂小粒瘪，发育不全，严重的甚至枯萎和死亡。[0005]中国小麦花叶病毒靠禾谷多黏菌传播，具有持续土传的特性。禾谷多黏菌是Ledingham(1939)在加拿大的小麦上首次分离发现的，并对该菌的形态学和生活史作了描述。禾谷多黏菌以游动孢子的形式侵染寄主，该菌的休眠孢子在自然条件下可以长期存活，适宜条件下能萌发产生游动孢子侵染寄主的根系，同时所带病毒对寄主造成侵染。在农事活动中，应杜绝传播途径，控制病害的蔓延。建立无病留种田，加强病害检疫，严禁从病区调种，不用病地土、病根茬等积肥，发病土壤应采用土壤灭菌法杀菌，作物实行轮作，减少菌源积累，最大程度地减少禾谷多黏菌侵染传病的有利条件。[0006]目前对于CWMV的防治还没有有效的防治药剂，最有效的防治方法是选育抗CWMV的小麦品种，优化栽培管理制度，综合防治，达到有效防控中国小麦花叶病毒病的目的。[0007]田间试验研究发现，松散型小麦品种较直立紧凑型易感病。经研究工作者大量筛选鉴定，已经确定Karl,Larned,Pandas,Hawk等4个品种对CWMV表现抗性,为我国CWMV抗病育种工作的开展提供了丰富的研究资源。[0008]在小麦的栽培管理中，适期迟播，避免麦苗冬前生长过旺造成冻害，降低植株的抵抗力。中耕除草，加强肥水管理，...