焦磷酸测序检测CYP2C19基因多态性方法的建立[摘要]目的建立一种基于焦磷酸测序技术的用于CYP2C19基因多态性快速检测的方法。方法选择2016年12月～2017年3月于贵州省人民医院行健康体检者50名，提取其基因组DNA，针对CYP2C19*2（681G>A）、CYP2C19*3（636G>A）、CYP2C19*17（-806C>T）3个单核苷酸多态性（SNP）位点分别设计一套PCR扩增引物和焦磷酸测序引物。将PCR扩增产物制备成单链测序模板，用QiagenPyroMarkQ24焦磷酸测序仪进行测序和基因型分析，采用Sanger一代测序技术对焦磷酸测序结果进行验证。结果根据出峰的碱基和峰高可清楚判断出3个SNP位点的不同基因型，检测结果与Sanger测序结果完全一致。50名健康体检者中检出CYP2C19超快代谢型1例，快代谢型22例，中代谢性22例，慢代谢型5例。结论本研究建立的焦磷酸测序检测CYP2C19基因多态性的方法具有快速、准确、成本低的特点，适用于临床实验室对CYP2C19基因多态性的分型。[关键词]CYP2C19；基因多态性；焦磷酸测序；氯吡格雷[]R446.9[文献标识码]A[]1673-7210（2017）10（b）-0011-04EstablishmentofgenotypingmethodsforpolymorphismsofCYP2C19genebasedonpyrosequencingtechnologyYANGNannan1XUQin1LUOZhenyuan2FUXue2HUANGShengwen2▲1.SchoolofClinicalLaboratoryScience，GuizhouMedicalUniversity，GuizhouProvince，Guiyang550004，China；2.DepartmentofClinicalLaboratory，GuizhouProvincialPeople′sHospital，GuizhouProvince，Guiyang550002，China[Abstract]ObjectiveToestablishafastdetectionmethodforCYP2C19genotypingbasedonpyrosequencingtechnology.MethodsGenomicDNAwasextractedfrom50bloodsamplesofhealthysubjectscollectedfromDecember2016toMarch2017inGuizhouProvincialPeople′sHospital，andasetofamplificationprimersandpyrophosphatesequencingprimersweredesignedaccordingtothesinglenucleotidepolymorphism（SNP）sitesofCYP2C19*2（681G>A），CYP2C19*3（636G>A），CYP2C19*17（-806C>T）.Single-strandedtemplatesweremadefromPCRproducts，thensequencingandgenotypinganalysiswereperformedonaQiagenPyroMarkQ24SequencerSystem.ThesequencingresultswereverifiedviaSangersequencing.ResultsBasedonthetypeandpeakheightofbasesofDNAsequence，thegenotypesofthreeSNPscouldbeidentifiedclearly，whichwereconsistentwithSangersequencingresults.Amongthe50samplesofhealthygroup，1casewasultra-rapidmetabolism，22caseswererapidmetabolism，22casesweremediummetabolismand5caseswereslowmetabolism.ConclusionThedetectionmethodofCYP2C19polymorphismbasedonpyrosequencingtechnologyisquick，accurateandconvenient，whichcanbeusedtoanalyzethegenotypingofCYP2C19genepolymorphism.[Keywords]CYP2C19；Genepolymorphism；Pyrosequencing；Clopidogrel氯吡格雷是?R床上常用的抗血小板聚集的药物之一，冠状动脉介入术（percutaneouscoronaryintervention，PCI）后患者需长期服用氯吡格雷来进行抗血小板治疗[1-2]，但临床上部分患者会出现氯吡格雷抵抗[3]。氯吡格雷的主要代谢酶为细胞色素P4502C19[4-6]，其编码基因CYP2C19的多态性是影响氯吡格雷疗效的主要遗传因素[7-8]。CYP2C19的等位基因以CYP2C19*1（野生型）、CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17较常见[9]。超快代谢型的基因型为*1/*17、*17*17，快代谢型的基因型为*1/*1，中代谢型的基因型为*1/*2、*1/*3，慢代谢型的基因型为*2/*2、*3/*3和*2/*3[10-11]。本研究采用焦磷酸测序技术建立了一种CYP2C19基因多态性检测方法，并用Sanger测序法对其准确性进行验证。1对象与方法1.1对象选择2016年12月～2017年3月贵州省人民医院健康体检成人50名，其中男21名，女29名，平均年龄为（35.7±9.7）岁。1.2主要仪器与试剂NP968核酸自动提取仪（西安天隆科技有限公司）；美国ABIVeriti96PCR仪（美国ABI生物系统公司）；QiagenPyroMarkQ24焦磷酸测序仪（德国凯杰公司）；PCR?U增引物和焦磷酸测序引物（上海生工生物有限公司）。1.3...