叶绿体转基因方法，超表达和纯化人血清白蛋白，蛋白质很容易受到蛋白降解艾丽西亚费尔南德斯-圣米1，天使明戈卡斯特2，迈克尔·米勒3，和亨利·丹尼尔1，*分子生物学的佛罗里达州中部，生物分子大学1系和微生物学，科学楼＃20，336室，奥兰多，佛罗里达州32816-2360，USA农业生物技术和自然资源的纳瓦拉，CSIC的公立大学2研究所，Mutilva巴哈31192西班牙纳瓦拉3奥本大学研究仪器设备-先进的显微及成像实验室，赤褐色，AL36849，USA概要人血清白蛋白（HSA）占血清中总蛋白的60％，它是最广泛使用的静脉内的蛋白质中的一些人的疗法。HSA，但是，目前提取的只有从血液因为缺乏商业上可行的重组表达的系统。HSA是高度敏感蛋白水解降解在重组系统和是昂贵的净化。HSA使用的Shine-Dalgarno顺序在转基因叶绿体表达（SD），这通常有利于超表达转基因，导致在仅在0.02％的HSA总蛋白（TP）。使用叶绿体非翻译HSA调节序列的修饰区（UTR）导致了过度表达的HSA（最高达11.1％，TP）的，补偿过度蛋白水解降解。这是药物蛋白在转基因表达最高植物和500倍高于转基因叶子HSA表达以前的报告。电子对免疫标记的转基因叶绿体的显微照片显示HSA包涵体，这提供了用于从其它细胞蛋白纯化的简单方法。HSA包容机构可以很容易地溶解，以便获得用适当的试剂以单体形式。该在这项研究中使用的调节元件应作为一个模型系统用于增强的表达外源蛋白是高度敏感的蛋白水解降解，并提供在优势纯化，包涵体形成的时候。关键词叶绿体基因工程;生物制药;转基因作物;分子农业;重组人血蛋白介绍可用性重组人蛋白发生了革命性的使用治疗宝贵的蛋白质在临床医学。植物提供了一个合适的替代微生物或因为它们的价格低廉的生产生物药物蛋白质的动物表达成本和不存在的人类病原体。但是，也有一定的局限性。尤其是，©2003Blackwell出版有限公司*通讯（传真+14078230956;daniell@mail.ucf.edu）。美国国立卫生研究院公共访问作者手稿植物生物工程学家作者的手稿;可在PMC2012年10月26发表在最后的编辑形式：植物生物工程学家2003年3月;1（2）：71-79。DOI：10.1046/j.1467-7652.2003.00008.x。NIH-PA作者手稿NIH-PA作者手稿NIH-PA作者手稿---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---核转基因植物的人类蛋白质的表达已经低得令人失望，例如：人血清白蛋白的总可溶性蛋白（TSP）的0.02％，人干扰素β0.000017％鲜重，人表皮生长因子茶匙和促红细胞生成素0.0026％0.001％茶匙（丹尼尔等，2001D）。因此，为了增加在表达水平是很重要为了利用植物生产药用重要的蛋白质。作为替代核表达，叶绿体转基因的方法已经开发作为有效的工具，生物制药的蛋白质在植物中的表达（丹尼尔和Dhingra，2002;丹尼尔等人，2001年，B;DeGray等人，2001;阿骨打等人，2000;的Staub等人，2000）。基于高分子蛋白质的表达与第一示范后，多样的医疗应用（阿骨打等人，2000），转基因叶绿体已经显示快递非常小的抗菌肽没有融合蛋白（DeGray等人。，2001），装配官能低聚物与霍乱毒素β亚单位的二硫键（丹尼尔等人，2001年b），和表达的单克隆抗体与协同表达和装配的重和轻链与正确折叠和形成二硫桥的（丹尼尔等人，2001年），这表明适当的氧化还原环境或需要伴侣蛋白是本在叶绿体中。功能的人类生长激素在转基因烟草中的表达叶绿体证实叶绿体能够人类蛋白的正确折叠的用二硫键（的Staub等人，2000）。表达多基因在一个单一的能力转化事件（丹尼尔和Dhingra，2002;德小筑等，2001），积累非常大量的外来蛋白质（德小筑等，2001），成功番茄有色体用于水果高水平转基因表达的工程（联阵等人，2001年），其耦合到超表达疫苗抗原（丹尼尔。等，2001年b），以及使用植物来源的无抗生素选择标记（丹尼尔等人，2001年c），好兆头口服交货可食用疫苗和生物制药是目前鞭长莫及那些谁最需要它们。此外，叶绿体基因工程是一个环保的方式，提供了转基因的遏制和解决基因沉默和核转基因植物（Bogorad，2000遇到位置效应;丹尼尔和Dhingra，2002;丹尼尔等人，2002年;丹尼尔，2002）。HSA是最广泛使用的静脉内蛋白质和被规定在multigram...