玉郎伞多糖对大鼠不同脑区腺苷酸环化酶的影响作者：梁霜，黄仁彬，王乃平，付书婕【摘要】目的从腺苷酸环化酶（adenylatecyclase,AC）水平来探讨玉郎伞多糖（yulangsanpolysaccharide,YLSPS）抗抑郁的作用机制。方法采用放射免疫方法测定大鼠前额皮层、下丘脑、海马AC的活性。结果YLSPS（150～600mg/kg）可激活正常大鼠前额皮层AC活性，YLSPS（600mg/kg）可抑制正常大鼠下丘脑、海马AC的活性（P《0.05）。结论激活大鼠前额皮层AC可能是YLSPS抗抑郁活性的重要机制之一。【关键词】玉郎伞多糖；腺苷酸环化酶抗抑郁药的作用机制至今尚未明确，受体后神经细胞信号转导过程是近年抗抑郁剂研究的焦点。玉郎伞多糖（yulangsanpolysaccharide，YLSPS）是从蝶形花科植物疏叶崖豆MillettiapulchraKurzvar.laxior（Dunn）Z.Wei的块根中提取的有效成分，由葡萄糖和阿拉伯糖组成［1］。本课题组前期研究表明，YLSPS可显著缩短行为绝望动物模型的累计不动时间，提高慢性应激小鼠脑内单胺类神经递质浓度，为更深入探讨YLSPS抗抑郁作用机制，本研究采用放射免疫法测定YLSPS对慢性应激小鼠不同脑区---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---AC活性的影响。1材料与仪器1.1动物SD雄性大鼠，体质量150～200g，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK（桂）2003-0003。1.2药物YLSPS，由本室自行提取（玉郎伞经醇提后的药渣用热水提取，乙醇沉淀，Sevag试剂脱蛋白，采用DEAE纤维素（DEAE-52）柱层析分离纯化，分离得到的YLSPS经Sephadex-75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法证实为高纯度多糖，纯度95%，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成，红外光谱显示有典型的多糖吸收峰）。盐酸氟西汀胶囊（fluoxetine，FLU，批号：071201，上海中西制药有限公司）。实验前将各试药用蒸馏水配成所需浓度，4℃冷藏备用。1.3仪器与试剂GC-1200γ放射免疫计数器（中国科学技术大学科技实业总公司中佳光电仪器分公司）；TGL-16G-A低温离心机（ShangHaiAnTingKeXueYiQiChang）；FJ-200高速均质分散机（上海标本模型厂）。环磷酸腺苷放射免疫分析试剂盒（北京普尔伟业生物科技有限公司，批号：20081024）。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---2方法2.1动物分组和给药将大鼠随机分成5组：空白组、氟西汀组（FLU组）、YLSPS低剂量组（YLSPSL组）、YLSPS中剂量组（YLSPSM组）、YLSPS高剂量组（YLSPSH组），每组10只。每日上午8时灌胃给药，1次/d，连续21d。2.2取材和样品处理将大鼠断头，在冰台上迅速分离前额皮层、下丘脑、海马，称重。取组织50mg，加入2ml冷的50mmol/LpH4.75醋酸缓冲液（27.22gNaAc·3H2O溶于1000ml蒸馏水，即为0.2mol/LNaAc。用冰醋酸配制0.2mol/L醋酸，然后取410ml0.2mol/LHAc和590ml0.2mol/LNaAc混匀，测pH值调到pH4.75，然后每1000ml溶液加入5.95gEDTA二钠盐溶解即得200mol/LpH4.75醋酸缓冲液，用时1∶4稀释）的试管内（冰浴），均浆，加入2ml无水乙醇，混匀，静止5min，3500r/min冷冻高速离心15min，将上清液收集在青霉素小瓶内，再用75%乙醇2ml洗沉淀，匀浆分散，混匀，3500r/min冷冻高速离心15min，合并---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---上清液，60℃烤箱中吹干，残渣放于4℃保存。测时用1ml醋酸缓冲液溶解，取0.1ml测量。2.3环磷酸腺苷（cAMP）的测定严格按照环磷酸腺苷放射免疫分析试剂盒要求测定各反应管中cAMP产生量。反应结束后,3000r/min离心15min，小心吸去上清液。在γ放射免疫计数器上测定沉淀CPM数。根据标准曲线计算cAMP的产生量。2.4数据统计处理数据用以±s的形式表示，采用SPSS13.0统计软件,选用单因素方差分析（ANOVA）来检验各组数据之间的差异性。3结果大鼠连续灌胃21d后，FLU（20mg/kg）和YLSPS中、高剂量（300，600mg/kg）组前额皮层cAMP量有所增加，与空白组相比具显著性差异（P《0.05或P《0.01）。而在下丘脑和海马区cAMP量略有下降。结果提示YLSPS在300～600mg/kg的条件下可激活...