他莫昔芬对雌激素干预后血管性痴呆大鼠海马CA1区GFAP表达的影响血管性痴呆(VascularDementia,简称VD):血管性痴呆是指因脑血管疾病所致的智能及认知功能障碍临床综合征。有资料显示我国AD与VD的比率大致相同[1]。由于VD的生活能力下降,严重威胁着老年人的健康和生存质量,给家庭和社会造成了巨大负担。近年来研究证实,雌激素对中枢神经系统损伤后有保护作用且能改善记忆和认知功能[2]，但其作用机制还不十分清楚。目前雌激素对星形胶质细胞影响的报道较少，本实验旨在探讨他莫昔芬作用于雌激素干预后VD大鼠后海马CA1区GFAP表达的影响,以期进一步揭示雌激素的脑保护作用机制,为应用雌激素防治血管性痴呆提供实验证据。1材料与方法1.1材料与试剂Y型电迷宫（江苏省张家港市生物医学仪器厂），德国Lecia图像采集系统，图像分析软件BiosensDigitalImagingSystem上海山富科学仪器有限公司；17β-雌二醇（美国Sigma公司）；他莫昔芬（武汉远城科技发展有限公司）；SP免疫组化染色试剂盒（北京中山生物技术有限公司）；兔抗GFAP多克隆抗体（北京中山生物技术有限公司）。1.2动物与分组---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---健康雄性Wistar大鼠,5～6月龄,体重250～280克,（河南省医学动物实验中心提供）,以Y型电迷宫筛选记忆良好的大鼠30只，随机分成他莫昔芬组，实验对照组,雌二醇治疗组。每组均为10只。1.3给药方法雌二醇治疗组于术后第2天起予以腹腔注射给17β-雌二醇200μg/kg（花生油溶解），隔天1次；他莫昔芬组给予他莫昔芬(3mg/kg)每日喂服60天，于术后第2天起予以腹腔注射给17β-雌二醇200μg/kg（花生油溶解），隔天1次；实验对照组给予等量消毒过的花生油,隔天1次，连续给药30次。1.4动物模型制作参照Ni等[3]方法制作慢性脑灌注不足动物模型。大鼠术前12h禁食,4h禁水,10%水合氯醛(3ml/kg)腹腔注射麻醉,保证手术期间有自主呼吸。仰卧固定,颈前部去毛消毒后正中切开,分离双侧颈总动脉,双重丝线结扎,间断缝合皮肤。术后动物送到通风的动物房饲养。1.5大鼠学习记忆能力测试采用Y型电迷宫法,于模型制作60d后在三等分Y型电迷宫内进行大鼠学习能力测试。先将大鼠放入迷宫内适应5min，使其对三臂均探索进入，然后从起步区臂出发，开始以随机次序变换测试。设定电压50V，延迟时间4S：电击后大鼠直接逃避至安全区为正确反应，否则为错误反应，每测1次休息30S，测l0次休息5min。大鼠学习成绩以连续30次电击测试中正确反应次数表示。每次测试均放在安静的、光线稍暗的条件下进行。记忆能力测试以24h后大鼠再次---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---测试30次,记录正确反应次数表示。1.6HE染色免疫组化染色常规灌注取脑，切取视交叉到小脑前的冠状位切片，经4%多聚甲醛溶液后固定24h，常规脱水石蜡包埋，作4～6μm厚的切片，HE染色。免疫组化染色采用SP（兔抗GFAP1:80）法常规染色。2统计方法在海马CA1区,每张片子分别选择5个相邻视野,在400倍光镜下随机计数GFAP免疫阳性细胞数,结果取5个视野的平均值。并经过统计软件SPSS10.0做单因素方差分析处理，对3组结果进行比较，取P《0.05为差异显著性。3结果3.1大鼠Y型电迷宫实验结果17β-雌二醇治疗组与实验对照组及他莫昔芬组相比能明显提高学习成绩和记忆成绩（p《0.05）,见表1。表15组大鼠学习和记忆成绩(MEAN±SD)组别只数（n）学习成绩记忆成绩他莫昔芬组1011.80±3.43*16.20±1.87*实验对照组1010.10±2.77*16.00±1.94*雌二醇治疗组1019.70±2.7521.60±2.46*表示用单因素方差分析与雌二醇治疗组相比，有显著性差异（P《0.05)。3.2HE染色光镜下病理形态学改变---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---①他莫昔芬组与实验对照组神经细胞结构松散、数目减少、排列紊乱，胞核深染、固缩，核仁消失，胞浆周围发现空晕，胞间距较大，并可见大量不规则形胶质细胞及散在胶质细胞增生小结，仅见少量正常神经细胞。②雌二醇治疗组偶见小的软化灶，正常神经细胞数目较多，排列较密，胞核圆或椭圆形，核仁清晰，染色质丰富，少见固缩变性...