海人酸致痫大鼠海马CA3区神经元线粒体超微结构损伤的观察【摘要】目的观察海人酸（KA）诱导的癫痫持续状态（SE）大鼠海马CA3区线粒体超微结构的损伤。方法选用成年雄性Wistar大鼠40只，随机分为KA组和生理盐水对照组（NS组）。用KA诱导大鼠SE持续2h，分别于SE终止后第1、3小时制作脑切片，采用光镜观察神经元的大体变化，并用电镜进一步观察线粒体的超微结构。结果SE终止后3h，大鼠海马线粒体出现了不同程度的损伤：从嵴的肿胀到膜的崩解。结论KA诱导的SE在早期即可导致海马神经元线粒体的损伤，这可能是SE后神经元损伤的关键环节。【关键词】癫痫持续状态神经元线粒体超微结构大鼠Wistar［ABSTRACT］ObjectiveToobservethemitochondrialultrastructuredamageintheneuronsofhippocampalCA3areaduringkainicacid(KA)inducedstatusepilepticus(SE)inrats.MethodsFortyadultmaleWistarratsweredividedintotwogroupsinrandom:KAgroupandcontrolgroup.SEwasinducedfortwohours.AtthefirstandthethirdhourafterterminationofSE,ratswerekilledandthebrainsectionsmade.Thegrosschangesofneuronwereobservedwithlightmicroscope,andthemitochondrialultrastructurewithelectronmicroscope.ResultsThreehoursaftertheendofSE,---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---variousdamagesofmitochondria,fromswellingofcristaetoruptureofmembrane,werenoted.ConclusionKainicacidinducedstatusepilepticus,initsearlystage,mayresultinmitochondrialdamageintheneuronsofhippocampus,whichmightbethekeylinkofneuronallesionafterstatusepilepticus.［KEYWORDS］statusepilepticus;neurons;mitochondria;ultrastructure;rats,Wistar长久以来，人们一直认为，线粒体是真核细胞内的能量加工厂，其基本功能是通过氧化磷酸化以ATP的形式为细胞提供能量。与之相关的蛋白定位于线粒体内膜上，包括呼吸链的组成成分和腺苷转移酶。生化研究显示，脑内大多数ATP的消耗用于神经元的电活动，故来自线粒体的充足的能量供应对神经元的生存和功能很关键。癫痫持续状态（SE）是医学上的急症，可导致持久的神经元损伤，增加其后痫性发作的危险性。近年来，关于SE后线粒体超微结构改变的报道较少。本文用海人酸（KA）制作SE模型，观察海马CA3区神经元线粒体超微结构的损伤，以进一步探讨SE后神经元损伤的机制。1材料与方法1．1动物及分组选用成年雄性Wistar大鼠40只，随机分为KA1、KA3组（分别为SE终止后1、3h），每组10只，每一时点分别设10只鼠作为生---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---理盐水对照组（NS1、NS3）。1．2SE模型的制作向KA1、KA3组大鼠腹腔内注射KA（购自美国Sigma公司,10mg/kg），同时向NS组大鼠腹腔内注射相同容量的生理盐水。观察大鼠出现痫性发作的时间和表现，并使之持续2h，然后腹腔注射地西泮（10mg/kg）以终止痫性发作。按照RACINE分级法，将动物痫性发作分为6级。0级：无惊厥；Ⅰ级：湿狗样颤动，面肌抽动、咀嚼；Ⅱ级：面部阵挛伴节律性点头；Ⅲ级：面部阵挛、节律性点头、前肢阵挛；Ⅳ级：前肢阵挛、后肢站立；Ⅴ级：失平衡、跌倒、四肢抽动、全身阵挛。1．3取材及标本制备在SE后第1、3小时，用100g/L水合氯醛（3.6mL/kg）将大鼠麻醉，剪开大鼠胸腔，将圆头针从大鼠心尖处插入，同时从右心耳处剪开心脏放血。先向心脏内快速推注生理盐水灌洗液（其量为灌注液的一半），直至从右心流出的液体变得清亮。然后立即向心脏内注射20g/L戊二醛，其用量为：体质量（g）×7%×2,灌注速度为5～10mL/min。注射完毕后立即断头，迅速取出双侧海马CA3区，置入30g/L戊二醛中保存2h，用PB液漂洗12～24h，1g/L四氧化锇后固定2h，PB液漂洗30min，常规乙醇、丙酮逐级脱水，Epon环氧树脂渗透包埋。1.4超微结构观察1．4.1半薄切片光学显微镜观察用KBLⅢ型超薄切片机切取厚约---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1μm的半薄切片，苏木精伊红染色后，用Olympus光学显微镜观察。...