半胱氨酸蛋白酶抑制剂对离体大鼠海马脑片CA1区神经元低氧性损伤的影响作者：张育才曾因明王钧张林［摘要］目的探讨半胱氨酸蛋白酶（Calpains）抑制剂PD150606对离体大鼠海马脑片CA1区神经元低氧性损伤的影响。方法大鼠海马脑片随机分为单纯低氧组（Con组，n=6）、PD50组（n=10）、二甲亚砜（DMSO）组（n=8）。Con组的海马脑片应用正常的人工脑脊液（aCSF）37℃孵育60min，PD50组、DMSO组的海马脑片分别用含有50μmol/L的PD150606、含体积分数0.003DMSO的aCSF孵育60min，所有脑片均低氧5min，复氧60min。应用细胞内记录技术，分别记录用药前及低氧前膜电位、缓慢除极的速率、快速除极时间及快速除极的幅度，复氧60min神经元的膜电位、神经元对细胞内注入电流及SCHAFFER旁路刺激的反应。应用碘化丙啶（PI）染色方法，计数复氧60min海马CA1区PI阳性神经元数。结果PD50组、DMSO组、Con组神经元用药前的基础膜电位、低氧前膜电位、快速除极时间、缓慢除极的速率差异无显著性（P》0.05）。用药后PD50组神经元快速除极幅度显著低于DMSO组及Con组，差异有显著---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---性（F=13.711，q=6.199、6.229，P《0.05）。PD50组的10例神经元中有8例在复氧60min后膜电位逐渐恢复到基础值水平，并对细胞注入电流及经SCHAFFER旁路刺激产生高幅度、持续时间短的动作电位。此外，PD50组海马CA1区PI阳性神经元明显少于DMSO组和Con组，差异有显著性（F=100.086，q=17.346、16.186，P《0.01）。结论Calpains抑制剂PD150606可以显著减轻大鼠海马CA1区神经元低氧性损伤，减少低氧-复氧后神经元的死亡，促进复氧后神经元电生理功能的恢复。［关键词］半胱氨酸蛋白酶抑制剂;海马;低氧缺血，脑［ABSTRACT］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofcysteineproteaseinhibitorPD150606onhypoxicdamagetoneuronsinCA1regionofhippocampusinrats.MethodsThehippocampussliceswererandomlydividedintoCon（n=6），PD150606（PD50，n=10）andDMSO（n=8）groups.TheslicesinCongroupweretreatedwithaCSFat37℃for60minbeforeintracellularrecording，andtheslicesinPDandDMSOgroupswereincubatedwith50μmol/LPD150606and0.003DMSOfor60minbeforein-tracellularrecording.Allslicesineachgroupweresubjectedto5minhypoxiaandfollowedby60minofre-oxygenation.Atthe---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---endofelectrophysiologicalresearch，thesliceswerestainedwithpropidiumidodide（PI）andthePIpositiveneuronsinCA1regionwascounted.ResultsPD150606significantlydelayedrapiddepolarizationandinhibitedrapiddepolarization（P》0.05）.After60minofre-oxygenation，eightoutof10neuronsinthePDgrouphaditsfunctionalrecovery.ThedeadneuronsinPDgroupweresignificantlylessthanthoseinConandDMSOgroups（P《0.05）.ConclusionCalpainsinhibitorPD150606couldsignificantlyinhibitthehypoxicdamagetoneuronsandenhancetheelectrophysiologicalfunctionalrecoveryofneuronsinCA1regionofhippo-campusinrats.［KEYWORDS］cysteineproteinase;hippocampus;hypoxia-ischemia，brain半胱氨酸蛋白酶（Calpains）是广泛存在于哺乳类动物细胞浆内的半胱氨酸蛋白酶家族，依赖细胞浆内的钙离子浓度增加而激活。激活后的Calpains可以降解细胞骨架蛋白、电压及配体门控性离子通道及与信号转导有关的G蛋白及酶等［1，2］。应用形态学及生化等指标的研究显示，Calpains抑制剂可以显著减轻神经元缺血低氧性损伤［3］。然而，该酶抑制剂能否促进缺血低氧后神经元功能---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---的恢复还缺乏直接的证据。本实验采用大鼠离体海马脑片，运用细胞内记录技术，结合碘化丙啶（PI）染色法，计数海马CA1区死亡神经元，以期对Calpains抑制剂PD150606对神经元低氧性损伤的影响进行客观及全面的评价。1材料与方法1.1材料选择SD大鼠12只，雄性，体质量280～340g，由美...