NR2B反义寡核苷酸对大鼠海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响作者：滕大才徐铁军张凤真【关键词】NMDA受体摘要:目的观察NMDA受体2B亚单位（NR2B）反义寡核苷酸（ANR2B）对海马CA1区NR2B蛋白质表达的影响，筛选有效的反义寡核苷酸，为探讨针对NR2B的新药物提供形态学基础。方法设计、筛选、合成ANR2B。正常SD大鼠，海马CA1区立体定位注射ANR2B，灌注取脑，连续冰冻切片，ABC免疫组织化学方法染色，光镜下观察NR2B蛋白质的表达变化。结果注射ANR2B后，注射区及其周围NR2B免疫组织化学染色强度明显下降，仅有少量锥体细胞和颗粒细胞散在分布;而在注射NR2B正义寡核苷酸（SNR2B）、生理盐水及生理盐水插针不注射的海马切片上，海马CA1区的染色特征与注射ANR2B者有明显差别，其作用区锥体细胞、颗粒细胞及顶树突的NR2B免疫组织化学染色强度无明显变化。结论ANR2B能够降低NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区的基础性高表达。关键词:NMDA受体;反义寡聚核苷酸;免疫组织化学;海马;大鼠---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---Abstract:ObjectiveToprobeintotheeffectofantisenseoligonucleotideonNMDAreceptor2B（ANR2B）inCA1sub-fieldofnormalrathippocampusasabasicapproachtothenewdrugregulatingtheexpressionofNR2Bprotein.MethodsANR2BandsenseoligonucleotidetoNMDAreceptor2B（SNR2B）werepreparedandinjectedintothenormalrathippocampalCA1subfieldunderwellcontrolledconditions.SerialcryosectionsofthebrainwereprocessedbyABCimmunohistochemistrytoexaminetheNR2Bexpression.ResultsTheimmunoreactivityofNR2BexpressionwasobviouslydecreasedinCA1subfieldaf-terANR2Binjection（P《0.05），leavingonlyafewpyramidalandgranularcellsfaintlystained.Buttheintensityofimmunore-activitywasnotalteredatallinthecontrolcasesofnormaltissue，normalsalineinjection，shameinjectionandSNR2Binjec-tion.ConclusionItislikelythatthehighbasalexpressionofNR2BinthenormalrathippocampalCA1subfieldcanbedown-regulatedbyusingtheantisenseoligonucleotidetechnique.Keywords:NMDAreceptor;antisense---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---oligonucleotide;immunohistochemistry;hippocampus;ratN-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartatereceptor，NMDAR）是兴奋性氨基酸的一种特异性受体，不仅与突触发育、兴奋性传递、神经元变性等有关，而且NMDA受体介导的神经兴奋性在缺血性脑损伤中起关键性作用［1］。海马是大鼠前脑的重要结构之一，和学习、记忆等一系列重要生理活动密切相关。在严重的短暂性前脑缺血后，海马CA1区将产生迟发性的神经元坏死，而齿状回则对缺血性损伤具有抵抗作用，不易出现神经元坏死。NMDA受体2B亚单位（NR2B）在海马CA1区的基础性高表达可能是CA1区缺血易损性的原因之一［2］。目前，亚单位相对特异性的拮抗剂在选择性保护神经元方面以及毒副反应上存在许多问题［3］。反义寡核苷酸技术是目前所知具有精确、高效、特异的基因调节手段。本实验将反义寡核苷酸技术引入干预NR2B蛋白质表达的研究，筛选出针对NR2BmRNA的特异性有效反义寡核苷酸，寻找干预NR2B蛋白质表达的新手段。1材料和方法1.1NR2B反义寡核苷酸（ANR2B）、NR2B正义寡核苷酸（SNR2B）根据NR2B的基因序列，用Biognos-tik专用软件设计筛选针对翻译起始区的反义寡核苷酸及相应的正义寡核苷酸，序列---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---为:ANR2B:5′-CTTCATCTTCAGCTAGTCGG-3′;SNR2B:3′-GAAGTAGAAGTCGATCAGCC-5′。由美国GIB-CO公司合成。1.2试验动物及分组健康雄性成年SD大鼠，体重250～300g，由徐州医学院实验动物中心提供。实验动物随机分为5组:注射ANR2B组（ANR2B组，n=6），注射SNR2B组（SNR2B组，n=6），注射生理盐水组（NS组，n=6），插针（有生理盐水）不注射组（NSNO组，n=6），正常对照组（不插针、不注射组，NO组，n=6）。1.3定位注射0.4%戊巴比妥钠（10ml.kg）...