17β-雌二醇对缺氧缺血性脑病新生大鼠海马CA1区细胞凋亡的影响【摘要】目的观察17β-雌二醇（17β-E2）对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型脑细胞凋亡及血清sFas、sFasL水平的影响。方法将7日龄SD大鼠75只随机分为假手术组、HIBD组以及HIBD+E2组，每组25只。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA法）分别测定血浆sFas、sFasL的含量，TUNEL法检测脑细胞凋亡率。结果HIBD+E2组与HIBD组相比，CA1区的凋亡细胞数明显减少，尤其在24h最明显；sFas、sFasL水平在各个时间点均明显降低，尤其在48h最明显(F=2.37~21.02,q=2.32~8.34,P《0.05、0.01)。结论腹腔内给予17β-E2可明显减少HIBD模型鼠海马CA1区细胞凋亡，sFas、sFasL水平呈明显回降。【关键词】缺氧缺血,脑；雌二醇；细胞凋亡；抗原,CD95［ABSTRACT］ObjectiveTostudytheeffectof17β-estradioloncerebrocellularapoptosisofpoxic-ischemicbraindamage(HIBD)inneonatalrats,andonserumsFas，sFasLlevelinbraintissue.MethodsSeventy-five7-dayoldWistarratswereevenlydividedintosham-operation,HIBDandHIBD+E2---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---group.ThenumberofcerebrocellularapoptosiswasdetectedbyHEandTUNELandplasmasFasandsFasLmeasuredbyELISA.ResultsIntheinterventiongroup,thenumberofapoptoticneuronswasmuchfewerthanthatinHIBDgroup(P《0.01),andconcentrationofsFasandsFasLwasmuchlowerthanthatincontrolgroup,especiallyin48h(P《0.05,0.01).Conclusion17β-estradiolcouldinhibitneuronalapoptosistoprotectneuronsandattenuatedbraininjuryafterHIBDinneonatalrats.AndtheconcentrationofsFasandsFasLintheinterventiongroupwaslowerthanthatofthecontrolgroup.［KEYWORDS］Hypoxia-Ischemia,brain;Estradiol;Apoptosis;Antigens,CD95新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)是新生儿常见且致残、致死率较高的疾病，其发病机制尚未完全明确。但已证实多种细胞因子参与了HIE的发病过程［1］。研究结果表明，HIE与细胞凋亡有关，17β-雌二醇（17β-E2）能有效地抑制海马区细胞的凋亡，但其具体机制不明。本研究在制备缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠模型的基础上，观察17β-E2对海马神经细胞凋亡的影响及HIE新生大鼠血清sFas、sFasL水平的改变，以探讨17β-E2在HIBD疾病中的作用---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---机制。1材料与方法1.1材料TUNEL试剂盒（Rochecompany，Germany）；sFas、sFasL定量ELISA试剂盒（上海森雄科技实业有限公司）；128C-340型酶标扫描仪（悦泰洋行）；CY-12C型便携式数字测氧仪（杭州梅城电化分析仪器厂）。1.2方法1.2.1实验分组取7日龄SD雌性新生大鼠75只，随机分为假手术组（A组）、HIBD组（B组）及HIBD+E2（C组）组，各25只。每组又分为6、12、24、48、72h等5个时段，每时段有5只动物。1.2.2HIBD模型制备分离出左、右颈总动脉并结扎。空气中放置30~120min后，将大鼠置于有机玻璃低氧舱内，维持氧体积分数在0.08(0.07~0.09)，舱内温度控制于（36±1）℃，湿度为70%±5%，持续3h。假手术组：动物只游离两侧颈总动脉，但不结扎之，以消除手术及手术中应激的影响。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---HIBD+E2组:手术前2h腹腔注射17β-E2100μg/kg。各组在实验结束后于不同时间点自股静脉采血，分离血浆后，取大脑组织，置冰箱中保存待检。1.2.3血浆sFas、sFasL水平测定采用双抗体夹心ABC-ELISA法。1.2.4TUNEL法检测细胞凋亡按TUNEL试剂盒说明操作，计算阳性细胞凋亡率。1.2.5统计学处理实验结果以x±s表示,用SPSS10.0软件进行统计分析。多个样本均数的比较采用单因素方差分析。2结果2.1HIBD后脑组织病理学变化HIBD后6h，海马出现少量凋亡细胞，表现为核固缩变圆，嗜碱性增强，核仁消失，并可见到凋亡小体；HIBD后12h，可见海马内有少量神经细胞肿胀，细胞淡染，有核碎裂；HIBD后24h，细胞凋亡达高峰，此时可见海马内有许多坏死细胞，嗜伊红深染；HIBD后72h，海马CA1...