二氢卡因酸盐对海马CA1区锥体神经元的影响【摘要】目的观察不同剂量谷氨酸转运体GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)对海马CA1区锥体神经元的影响。方法采用四血管闭塞法（4VO）制作大鼠全脑缺血模型，右侧脑室注射DHK。脑组织切片硫堇染色法观察海马CA1区锥体神经元迟发性死亡（DND）程度，确定组织学分级（HG）。结果对照（双蒸水）组海马CA1区未见明显的DND,不同剂量DHK引起不同程度海马CA1区的DND，且呈剂量依赖性。结论不同剂量谷氨酸转运体GLT1抑制剂DHK引起海马CA1区锥体神经元迟发性死亡，且呈剂量依赖性。【关键词】二氢卡因酸盐；海马；大鼠【Abstract】ObjectiveTheeffectofDHK,aselectiveinhibitorofglutamatetransportersubtypeGLT1,onthepyramidalneuronsintheCA1hippocampuswasinvestigated.MethodsGlobalcerebralischemicmodelwasmadebyFourvesselocclusion.DHKwasadministratedbyinjectionintorightlateralcerebralventricle.Thebrainoftheratswassectionedandstainedwiththionintoshowdelayedneuronaldeath(DND)andHistologicalGrade(HG)intheCA1hippocampus.ResultsTherewasnoapparentDNDincontrol---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---(distilledwater)group.DHKofdifferentdosescausedDNDofpyramidalneuronsintheCA1hippocampus,andtooffterdosedependent.ConclusionDHKcausedDNDofpyramidalneuronsintheCA1hippocampusinadosedependentmanner.【Keywords】Dihydrokainate；Hippocampus；Rat脑缺血时细胞外液中谷氨酸等兴奋性氨基酸浓度异常增高，这些兴奋性氨基酸与突触后膜的受体结合，引起钙、钠离子内流增多而导致钙超载，从而引起神经细胞损伤，因此将这些氨基酸称为兴奋性神经毒素［1］。降低脑缺血时细胞外液中谷氨酸的浓度，减少其与突触后膜特异性受体的结合，是防治其兴奋性毒性作用、减轻缺血时神经元损伤的重要手段。兴奋性氨基酸转运体（EAATs）是调控脑内细胞外液谷氨酸浓度的重要机制。到目前为止，发现并克隆了GLAST、GLT1、EAAC1、EAAT4和EAAT5五种高亲和性EAATs［2］。GLAST、GLT1为胶质细胞转运体，EAAC1、EAAT4和EAAT5为神经元转运体［3］，其中GLT1在终止谷氨酸能神经传递，维持细胞外液谷氨酸浓度处于低水平，防止其兴奋性毒性作用方面发挥重要作用。本实验旨在观察不同剂量GLT1抑制剂二氢卡因酸盐(DHK)对海马CA1区锥体神经元的影响。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1材料与方法1.1动物模型采用四血管闭塞法制造大鼠全脑缺血模型［4］。健康雄性Wistar大鼠（280～320g）36只，由河北医科大学实验动物中心提供。所有动物均首先进行双侧椎动脉凝闭。侧脑室注射方法：10%水合氯醛麻醉，参照脑立体定位图谱，右侧脑室注射双蒸水或GLT1特异性抑制剂DHK溶液20μl,2min注射完，留针2min。1.2实验分组将凝闭双侧椎动脉2d的动物随机分为2组：①蒸馏水组（n=6）：右侧脑室注射双蒸水溶液20μl；②DHK组（n=30）：右侧脑室注射DHK溶液20μl，根据DHK的剂量进一步分为10、100、200、500和1000nmol5个亚组，每组6只。以上各组动物均在末次手术后7d断头取材，行组织学观察。1.3观察指标及方法以上各组动物末次手术后7d断头取脑，冠状切取视交叉后1～4mm脑组织，常规脑组织切片，硫堇染色观察海马组织学改变。参照Kato［5］分级方法，将海马CA1区组织学改变分为0、1、2、3级。高倍镜下计数海马CA1区每1mm区段内锥体细胞数目，每张切片双侧海马各计数3个区段，取平均数为神经元密度（ND）。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.4数据处理应用SPSS软件进行统计分析。2结果蒸馏水组海马CA1区锥体细胞排列整齐，无细胞缺失，细胞形态完整，胞核饱满，核仁清晰，尼氏体丰富，见图1A(封4)；侧脑室给予DHK可引起海马CA1区锥体神经元不同程度的迟发性死亡(DND)，且呈剂量依赖性，见图1B、C、D、E、F(封4)和表1。表1DHK对海马CA1区锥体神经元的影响*与蒸馏水组比较，*P＜0.013讨论谷氨酸是人和哺乳动物中枢神经系统内含量最高的兴奋性氨...