新疆地区鲍曼不动杆菌β-内酰胺酶基因研究作者：季萍张朝霞于飞朱震宏高小妹【摘要】目的了解20株鲍曼不动杆菌(A.baumannii，AB)β-内酰胺酶基因存在状况。方法用PCR方法对20株AB菌的9种β-内酰胺酶基因进行检测。结果20株AB菌中blaTEM阳性13株(65%)、blaADC阳性12株(60%)、blaSHV阳性1株(5%)，其余β-内酰胺酶基因均阴性；1株blaSHV测得序列经比对为blaSHV-36型；1株blaADC作全长基因测序，测得序列经比对与美国核酸库已登录的blaADCDNA序列均不同，为新亚型。结论该20株AB菌对β-内酰胺类抗生素耐药与产β-内酰胺酶密切相关。【关键词】鲍曼不动杆菌；β-内酰胺酶；耐药基因ABSTRACTObjectiveToinvestigatetheencodinggenesofβ-lactamaseson20strainsofAcinetobacterbaumanniiisolatedinXin激angprovince.MethodTwentystrainsofA.baumanniiwereisolatedfromhospitalizedpatients,and9kindsofβ-lactamasesgenesweredetected.ResultsThedetectionratesofβ-lactamasesencodinggenesofblaTEM,blaADCandblaSHVgroupswere65%,60%and5%respectively,andtheotherswerenotfoundinallthetestedisolats.Withsequencingandalignment,thePCRamplificationproductofblaSHVwasidentifiedasblaSHV----本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---36.Thefullsequenceofoneβ-lactamaseADCstrainwasdifferentwiththatofβ-lactamaseACDGenBank,anditwasanewsubtype.ConclusionsDrug-resistanceofthe20strainstoβ-lactamwerecloselyrelatedwithβ-lactamases.KEYWORDSAcinetobacterbaumannii;β-lactamases;Resistantgene鲍曼不动杆菌(A.baumannii，AB)为腐生菌，广泛分布于自然界，也可从人体皮肤分离到。AB菌产β-内酰胺酶(β-lactamases)导致医院感染的暴发或流行时有发生。国外报道从AB菌得到blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaPER、blaVEB、blaCTX-M、blaCARB、blaIMP和blaVIM等β-内酰胺酶基因［1～11］。我国从β-内酰胺类耐药AB菌得到blaTEM、blaSHV、blaOXA、blaPER、blaDHA、blaGES、blaVEB、blaIMP和ampC等β-内酰胺酶基因［12～22］。为了解我院AB菌临床分离株中β-内酰胺酶基因存在状况，我们对20株AB菌进行了blaTEM、blaSHV、blaPER、blaVEB、blaGES、blaCARB、blaCTX-M-1群、blaADC和blaDHA等9种β-内酰胺酶基因检测，现报告如下。1材料与方法1.1菌株20株AB均分离自2006年9月～2006年12月间我院住---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---院患者临床标本，其中痰液11份，尿液4份，血液5份。全部菌株均使用VITEK—TWO细菌鉴定仪鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。1.2抗菌药物敏感性试验为微量肉汤稀释法和KB法测定23种抗菌药物的敏感性，并根据美国CLSI2006年版要求进行敏感性判断。1.3细菌处理挑纯培养菌落置入0.5ml离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200μl)，56℃水浴2h，改95℃水浴10min，加入Chelex-10040μl，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。1.4基因检测基因检测全部采用PCR法，各种靶基因引物序列和目的产物长度见表1。blaADC作全长基因扩增测序引物为5′-ATGCGATTTAAAAAAATTTC-TTGTC/TTA-3′，5′-TTATTTCTTTATTGCAT-TCAGCACAA/GC-3′。各种靶基因PCR扩增体系均为：每反应体系P1、P2引物各0.5μmol/L，dNTPs各200mmol/L，KCl10mmol/L，(NH4)2SO48mmol/L，MgCl22mmol/L，Tris-HCl(pH9.0)10mmol/L，NP400.5%，BSA0.02%(wt/vol)，TaqDNApol1U。总反应体积20μl(其中模板液5μl)。热循环参数(PCR产物长度》500bp)为：93℃预变性2min，然后---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---93℃60s→55℃60s→72℃60s，循环35周期，最后一个72℃延长至5min，其余均为：93℃预变性2min，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，循环35周期，最后一个72℃延长至5min。产物经2%琼脂糖凝胶电泳，出现与阳性对照分子相当的目的条带为阳性。耐药基因检测试剂盒、靶基因PCR引物序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提...