切除部分Ranvier区对骺板软骨细胞bcl-2和bax表达的影响作者：张克勇蔡林袁诚霞陈方舟汪鹏【关键词】bax摘要:目的:探讨凋亡相关基因bax、bcl-2在Ranvier区部分切除后骺板软骨组织中的表达。方法:切除12mm长的新西兰大耳白兔的胫骨近端Ranvier区，于术后1、4周处死实验兔，从免疫组化方面观察凋亡相关基因bax、bcl-2在Ranvier区部分切除后不同周龄的兔胫骨近端骺板软骨组织中表达的变化特征。结果:随着Ranvier区部分切除后，骨桥形成前骺板软骨组织中的软骨细胞凋亡率明显低于对照组，骨桥形成后软骨细胞凋亡率明显高于对照组。结论:Ranvier区和骨桥对骺板软骨细胞的凋亡率有促进作用，骨桥的促进作用更明显。关键词:bax;bcl-2;Ranvier区;骺板累及Ranvier区的损伤常导致骺板横向和纵向的发育紊乱［1］，也有可能导致骨软骨瘤等骨肿瘤的发生［2］，Ranvier区在骨发育中的作用越来越受到重视。Ranvier区的损伤对骺板软---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---骨细胞凋亡相关基因bax和bcl-2的表达是否有影响，目前仍然不清楚。因此，本研究利用切除Ranvier区后的骺板软骨作为研究模型，试图从骺板软骨组织的整体上了解bax及bcl-2在切除Ranvier区后的骺板软骨细胞增殖和凋亡过程中的表达，探讨bax及bcl-2在切除Ranvier区后骺板软骨细胞凋亡中的分子生物学机理。1材料与方法1.1动物模型制作选用封闭群系日本大耳白兔24只，兔龄5周，体重0.5～0.7kg，随机分为两个实验组，每组12只。两个实验组均采用一侧胫骨近端骺板为实验部位，另一侧作对照组。1%戊巴比妥钠3ml/kg静脉麻醉，手术野常规消毒，根据兔的解剖作各实验侧膝前内侧直切口，长约3cm切开皮肤皮下组织，暴露胫骨结节以上胫骨体前内侧面。暴露干骺端骺板骨软骨膜环，于骺板上方1.5mm至下方1.0mm处以小尖刀环形切除，厚约0.5mm、宽2～3mm、长度为12mm骨软骨膜。然后结扎止血，逐层缝合组织。对照组暴露干骺端骺板骨软骨膜环后，不作切除，全层缝合组织。分别于术后1、4处死实验兔，每次每组处死6只。解剖出双侧胫骨。---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---1.2检测方法及指标项目1.2.1组织学观察新鲜标本在10%中性甲醛溶液中固定1周，然后用10%EDTA室温下脱钙1月。冠状面纵行剖开，制作成4μm连续石蜡切片，HE染色染色。镜下观察骺板损伤后的病理改变。1.2.2bcl-2和bax表达检测方法bcl-2、bax单克隆抗体、SP试剂盒均为武汉博士德生物技术公司产品。采用SP免疫组化染色法，按照试剂盒的操作步骤进行。400倍显微镜下分别观察bcl-2和bax蛋白的表达，并计算每10个随机高倍镜视野中阳性细胞的表达率。1.3统计学处理应用SPSS11.5统计软件包进行统计，采用方差分析，检验水准α=0.05。2结果2.1骺板损伤后的病理演变术后1周:RG切除区由开始纤维化的肉芽组织覆盖，骺板外侧软骨细胞增生带明显增厚。有薄层骨质从二次骨化中心紧贴骺板外缘向下爬行至骺板外侧软骨细胞增生带，肥大带向下延长，骺板呈向下弯曲现象（图1A）。术后4周:RG切除区由纤维结缔组织覆盖，骺板外缘的骨质明显增厚，覆盖整个骺板，骺板外侧软骨细胞较一周时细胞数量明显减少，并向下延续---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---形成一条由增生、肥大及钙化软骨细胞组成的软骨带（图1B）。2.2bcl-2蛋白的表达结果bcl-2蛋白在细胞内为胞浆表达，光镜下呈现棕黄色颗粒，正常细胞表达程度较强而凋亡细胞表达程度较弱或不表达。本实验1W切除组bcl-2蛋白表达的细胞数量多，颜色深，呈强表达（图2A）;对照组则表达细胞数少，且色泽浅，呈弱表达（图2B）;1W切除组的阳性表达率为41.53%，对照组的阳性表达率为32.46%，两者的差异具有显著性（χ2=14.32，P《0.05）。4W切除组的表达程度弱于对照组（图2C，D）。2.3bax蛋白的表达结果bax蛋白在细胞内表达部位及表达形态、色泽与bcl-2蛋白相同，但表达强度和意义有所区别，即正常细胞表达程度通常较弱或不表达而凋亡细胞表达程度较强。本实验1W切除组细胞数表达且色泽浅，呈弱表达（图3A）;对照组表达细胞数量多，颜色...