基于SAP靶标的抗动脉粥样硬化研宄（滨海县市场监督管理局江苏盐城225500）【摘要】SAP能与体内运输胆固醇的HDL通过Ca2+依赖性结合，同时HDL被认为具有抗粥样硬化的作用，且SAP与HDL在体内呈负相关。目前的临床研究表明盐酸苄丝肼对于脑膜炎或合并脑动脉硬化的效果比较好，推测盐酸苄丝肼同样能够作用于血管的粥样硬化，故而对实验小鼠进行腹腔给药。木实验通过对小鼠胸主动脉血管切片的油红0染色来观察动脉血管壁的斑块情况，结合Q-PCR技术来检测SAP的mRNA在体内的转录水平以及运用EUSA法测定不同组别小鼠体内的SAP含量，结果表明，盐酸苄丝肼是可以下调SAP的基因转录寄表达。【关键词】SAP；抗动脉粥样硬化；胆固醇【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）29-0102-021.油红O染色观察小鼠胸主动脉的斑块面积2.Q-PCR法测定目的基因的mRNA水平实验方法：2.1RNA的提取2.2总RNA浓度测定（1）取总RNA溶液1.5?1，用0.1%DEPC-H2O稀释至1.5ml（2）以0.1%DEPC-H2O作为空白对照，用微型分光光度计测定在260nm和280nm波长处的吸光度（OD260、OD280）,根据OD260/OD280以判定RNA纯度（测定时需将RNA置于冰上）（3）根据下式计算RNA浓度，并用0.1%DEPC-H2O调整RNA浓度为l?g/?l。RNA浓度（?g/?l）=OD260×40?g/ml×稀释倍数/1000o2.3逆转录反成2.4PCR反应（1）以逆转录后的cDNA为模板，用特异性的引物进行PCR扩增。在实验操作吋，可以提前将正向引物和反向引物混合，分装冻存，用吋直接取0.4?1即可。（2）上机操作打开仪器和电脑→点击SteponeSoftware→ExperimentName→Steponepluslnsfrument（96wells）,AACt→SYBRGreenReagents→Standard（-2hourstocompletearun）3.ELISA法定量测定小鼠血清中SAP含量实验结果3.1小鼠胸主动脉汕红0染色显微观察结果（200倍）实验前期选取ApoE基因缺失小鼠作为实验对象，喂食高脂饲料进行造模，分组空白对照组和模型组，再根据腹腔注射盐酸苄丝胼药量的不同，分设低、中、高三组给药组。空白对照组的小鼠动脉血管切片，汕红染色后显微镜下观察的结果比较清晰，在血管壁附近没冇发现斑块的踪迹；模型组的小鼠动脉血管切片，显微镜下观察的通过同样比较明显，血管壁附近奋一块较大的很明显的脱落型的斑块，这也表明造模比较成功。给药低剂量组的小鼠动脉血管切片，显微镜下不能发现向模型组那样人的斑块，但是血管壁上还是能够发现一些小的斑块的踪迹。给药中剂量组的小鼠动脉血管切片，血管壁上也能发现一些小的斑块。给药高剂量组的小鼠动脉血管切片，血管壁上零星能看见•-些小斑块。由于斑块比较小，给药三组的切片染色结果其实相差不明显，没冇表现出明显的梯度，都只能说明给药是能够减少斑块的形成，还不能说明某种剂量是治疗动脉粥样硬化的最佳剂量。3.2Q-PCR实验结果荧光定量PCR的结果显示，不同组别的小鼠体内含有的血清淀粉样蛋白（SAP）的mRNA水平是不冋的。苏中空白对照组的SAP的mRNA的水平较低，符合预期。而模型组相较于空白对照组的水平明显升高。低剂量给药组的SAP的mRNA的水平也与模型组给药后，小鼠体内的SAP的mRNA的水平是明显降低的。高剂量给药组的mRNA水平相较于模型组反而上升了，说明可能高剂量给药对动脉粥样硬化的效果并不是很明显，反而低剂量给药组的治疗效果比较明显。Q-PCR的结果能表明盐酸苄丝胼是能抑制SAP的mRNA的水平。3.3ELISA实验结果EUSA的结果显示，空白对照组结果符合预期，含量比较低。模型组的SAP含量明显升高，跟空白对照组形成超显著性差异。低剂量的SAP含量最低，高中剂量组次之，中剂量组相对高一点。表明动脉粥样硬化与体内SAP的含量存在一定的联系，但是给药三组的SAP含量并没有表现出一定的梯度性变化，都只能表明给药是有利于降低SAP的含量，可以抑制动脉粥样硬化。4.实验讨论前期试验通过给ApoE基因缺失的小鼠喂食高脂饲料建立模型组，给喂食后的小鼠同吋腹腔注射不同含量的盐酸苄丝胼建立低、中、高三个组别，选取喂食正常饲料的小鼠作为空白对照组，最终建模成功。首先对不同组别小鼠的胸主动脉血管切片进行油红0染色，判断出小鼠是杏患有动脉粥样...