萎叶提取物抗氧化及抑菌活性探究摘要：目的：观察萎叶各部分提取物的抗氧化及抗菌实验效果。方法：采用滤纸片法对6种常见细菌的生长抑制活性进行测定，用DPPH法及连苯三酚红褪色法进行抗氧化研究。结果：萎叶提取物对藤黄球菌、大肠杆菌、普通变形杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、佛氏痢疾杆菌均有抑杀作用；萎叶提取物均具有抗氧化作用。结论：萎叶果实部分乙醇提取物具有更强的抗菌作用；篓叶叶子部分乙醇提取物具有较强的抗氧化活性。关键词：萎叶；抗氧化；抑菌活性中图分类号：R285.5文献标识码：A文章编号:1007-2349(2011)05-0057-03篓叶(PiperbetleLinn.)别名□酱、青口、芦子、大芦子、槟榔口、槟榔，属胡椒科胡椒属植物[1]o萎叶在我国古代曾是有名的栽培植物和野生药用植物，以全株或茎、叶入药，味辛、微甘，温。全株及茎叶全年可采为药用。具有祛风散寒，行气化痰，消肿止痒的功效。主要用于治疗风寒咳嗽，支气管哮喘，风湿骨痛,胃寒痛，妊娠水肿；外用可治皮肤湿疹，脚癣等皮肤疾病[2]o因为篓叶的抗病抗虫性强，长期咀嚼萎叶还有护齿作用。研究发现萎叶的提取物对老鼠的可逆性节育有一定作用［3］□萎叶中的主要成分是生物碱、木脂素、黄酮类［4~5］□本文采用DPPH法及连苯三酚红法对萎叶提取物进行了抗氧化活性研究，并分别采用萎叶的多种提取物对多种菌株进行抑菌了实验，拟观察萎叶体外的抗氧化及抑菌效果，为中药萎叶的开发和应用提供基础理论依据。1材料与方法1.1实验材料1.1.1材料与试剂萎叶(PiperbetleLinn.)采自云南保山。标本经云南大学生物系马绍宾教授鉴定后保存于云南民族大学生物技术实验室。DPPH(11-diphenyl-2-picryl-hydrazyl二苯代苦味脐基自由基),日本东京化成株式会社生产；连苯三酚红丄EADMAN公司生产；没食子酸，实验室自制；其它试剂均为国产分析纯。1.1.2供试菌种藤黄球菌(Micrococcusluteus\大肠杆菌(Escherichiacoli\普通变形杆菌(Proteusmirabilis\金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、绿脓杆菌(Pseudomonasaeraginosa)、佛氏痢疾杆菌(Valsalvadysenterybacillus)购置于云南大学微生物实验室以牛肉膏蛋白月东琼脂培养基培养［6］备用。1.2仪器与设备(只标注主要的)旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂；循环水式真空水泵，河南巩义市英峪华仪器厂；7200型分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；恒温箱，上海实验仪器厂；手提式压力蒸汽灭菌锅，广州市化南医疗器械厂；超净工作台，苏州净化集团安泰设备公司。1.3方法1.3.1萎叶提取物浸膏的制备称取晒干切碎的萎叶茎、叶和果实各100g，分别用95%的酒精和70%的丙酮直接回流3h,重复4次，留分用旋转蒸发器减压浓缩，蒸干溶剂,得膏状提取物，称重。置于小瓶子中保存备用。1.3.2萎叶提取物的抑菌活性研究取萎叶的各种提取物0.1g各加入1mL95%的乙醇使其完全溶解得浓度为10%的溶液，再依次稀释为5%、2.5%的浓度梯度。灭菌后放置备用。利用滤纸片琼脂扩散法［7~8］对萎叶提取物进行抑菌活性测定。1.3.3萎叶提取物的抗氧化活性研究取萎叶各种提取物按质量浓度均为1.05g/L配制成抗氧化剂溶液。按以下方法进行抗氧化活性研究。1.3.3.1DPPH自由基捕获分光光度法［9］往10mL比色管中依次加入4mLpH6.88标准磷酸盐缓冲溶液，4mL0.1777mmol/LDPPH溶液，混匀，再加入一定量抗氧剂溶液，蒸馆水补充体积至10mL刻度，充分混匀，10min后在520nm处测量吸光度。对DPPH自由基的清除率的计KQP(%)=[1-(Ani-AOj)/AQc]xlOO式中：A□匸加抗氧剂反应后DPPH溶液吸光度；ADj=不加DPPH,只加抗氧剂及水的溶液的吸光度；ADc=未加抗氧剂，只加DPPH及水的溶液的吸光度。1.3.3.2连苯三酚红褪色光度法[9]往10mL具塞比色管中，依次加入2mLpH9.1的Na2COLI3—NaHCOLl3缓冲溶液0.7mL0.0038mol/LEDTA-FeQ2□+溶液,3.5mL0.0001mol/L连苯三酚红溶液，0・7mL体积分数0.6%H2O2溶液，蒸馆水补充至刻度后在259保温反应30min(上面每加一次均需摇匀)，测544nm处的吸光度。设不加H2O2时的吸光度为AD0,加入H2O2后的吸光度为AQb，则轻自由基产生量可用△A=AQ0-AQb来表征。在体系中加H2O2之前加入一定量的抗氧剂样品，测定其吸光度AOSo则抗轻自由基氧...