HPLC_ELD法联用测纯度高效液相色谱分离-蒸发光散射检测法测定海藻糖的纯度魏泱,丁明玉*(清华大学化学系,北京101084)摘要:用反相高效液相色谱法分离-蒸发光散射检测法测定了海藻糖的纯度,检测下限为5mg/L。在30～1010mg/L范围内,海藻糖浓度的对数与ELSD测得的峰面积对数具有良好的线性关系。关键词:高效液相色谱法;蒸发光散射检测法;海藻糖:O657.7文献标识码:A:1010-0730(2001)01-0005-03海藻糖(trehalose)是一种二糖,由两个葡萄糖分子通过T-T-(1→1)糖苷键链接而成。它是一种非还原性糖,在酵母中含量很高。可以在干燥的环境中起到保护酶、疫苗等活性物质的作用,目前在化妆品、医药等方面得到了愈来愈广泛的应用。中国科学院微生物研究所利用生物合成,从酵母中提取出高纯度的海藻糖。传统定性分析海藻糖的方法主要是纸层析和薄层层析法。纸层析法也可作为定量分析海藻糖的方法,但其定量的准确度和重现性都无法与高效液相色谱法(HPLC)相比。HPLC法通常用糖分析柱[1]、氨基键合柱[2～4]或C18柱[5,6]作固定相,以乙腈和水的混合溶剂或纯水为流动相来分析糖。糖本身在紫外区无吸收,通常使用示差折光检测器(RID)[1,6],或者通过衍生化[2,5]后再进行检测。RID灵敏度较低,衍生化法操作繁琐,且不可避---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---免地会引入误差。蒸发光散射检测器(ELSD)作为一种新型的通用型检测器,目前正得到越来越广泛的应用。ELSD利用了流动相与被测物之间的蒸汽压相对差异,柱洗脱液进入雾化器针管,在针的末端,洗脱液和充入的气体(通常为氮气)混合形成均匀的微小液滴;漂移管的作用在于使流动相挥发,蒸汽压较小的被测物颗粒经过漂移管进入光散射池;在光散射池中,被测物颗粒散射光源发出的光,经检测器检测散射光,产生电信号。ELSD在检测类酯[7]、表面活性剂[8]等物质中发挥着较大的作用,同样可以直接对糖[3,4]进行检测,且具有较高的灵敏度。本研究力图通过实验,建立起一种快速、准确、直接测定海藻糖纯度的HPLC/ELSD法。1实验与方法1.1仪器与试剂HP1101高效液相色谱仪(美国HewlettPackard公司):配有四元梯度泵、二极管阵列检测器(DAD)和化学工作站。另配有Alltech500ELSD(美国Alltech公司)。海藻糖,纯度101.5%(Sigma公司);海藻糖样品(中国科学院微生物研究所合成);甲醇为色谱纯,其它试剂均为分析纯。水为二次重蒸去离子水。流动相使用前用0.45μm滤膜过滤。1.2色谱条件色谱柱:ZorbaxSB-C18(4.6mmID×25cm,5μm),HewlettPackard公司产品,流动相:甲醇—水(4∶1,V/V),流速:0.8mL/min;柱温:25℃;进样量:20μL;ELSD参数:漂移管温度为75℃,氮气流速为1.75L/min。1.3标准溶液的配制称取101.5mg海藻糖标样(101.5%)溶于101mL甲醇中配制成储备液(对应海藻糖浓度为1010mg/L)。使用前以甲醇稀释成适当浓度的工作溶液。收稿---本文来源于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---日期:2000-03-02;修订日期:2000-05-19作者简介:魏泱(1975-),男,硕士研究生—5—第20卷第1期2001年1月分析试验室ChineseJournalofAnalysisLaboratoryVol.20.No.12001-1DOI:10.13595/s://wwsodocs/doc/2212497884ki.issn1010-0730.2001.0002高效液相色谱分离-蒸发光散射检测法测定海藻糖的纯度魏泱,丁明玉*(清华大学化学系,北京101084)摘要:用反相高效液相色谱法分离-蒸发光散射检测法测定了海藻糖的纯度,检测下限为5mg/L。在30～1010mg/L范围内,海藻糖浓度的对数与ELSD测得的峰面积对数具有良好的线性关系。关键词:高效液相色谱法;蒸发光散射检测法;海藻糖:O657.7文献标识码:A:1010-0730(2001)01-0005-03海藻糖(trehalose)是一种二糖,由两个葡萄糖分子通过T-T-(1→1)糖苷键链接而成。它是一种非还原性糖,在酵母中含量很高。可以在干燥的环境中起到保护酶、疫苗等活性物质的作用,目前在化妆品、医药等方面得到了愈来愈广泛的应用。中国科学院微生物研究所利用生物合成,从酵母中提取出高纯度的海藻糖。传统定性分析海藻糖的方法主要是纸层析和薄层层析法。纸层析法也可作为定量分析海藻糖的方法,但其定量的准确度和重现性都无法与高效液相色谱法(HPLC)...