气相色谱―质谱法用于人尿中4种二羧酸的含量检测[摘要]目的建立?y定人尿中有机酸二羧酸类含量分析方法。方法采用离子轰击（EI）离子源质谱检测尿中二羧酸含量。尿液样品前处理：采用内标法，样品先进行α-酮肟反应，再硫酸甲醇溶液进行甲酯化处理，氯仿萃取有机二羧酸。结果线粒体肌病组辛二酸含量均低于正常组和重症肌无力组（P<0.05）；线粒体肌病组和重症肌无力组庚二酸含量均明显低于正常组（P<0.05）。精密度日内RSD为1.00%～2.84%，日间RSD为2.01%～3.87%，加标平均回收率为88.47%～104.09%，RSD为1.24%～4.19%。结论气相色谱质谱法测定尿液二羧酸类有机酸化合物方法简便准确，重现性好，可用于帮助临床筛查肉碱循环酶缺陷遗传代谢病。[关键词]二羧酸；气相色谱-质谱法；线粒体肌病；重症肌无力；尿液[]R284.1[文献标识码]A[]1673-7210（2018）03（c）-0097-04[Abstract]ObjectiveToestablishananalyticalmethodforthedeterminationoforganicacidsdicarboxylicacidinhumanurine.MethodsThecontentofdicarboxylicacidintheurinewasdetectedbyionbombardment（EI）ionsourcemassspectrometry.Urinesamplepretreatment：byusinginternalstandardmethod，thesamplewastakenα-ketoximereactionfirst，andthensulfuricacidmethanolsolutionwascarriedouttheprocessofmethylesterification，chloroformwasusedforextractionoforganicdicarboxylicacid.ResultsThecontentofsubericacidinmitochondrialmyopathygroupwaslowerthanthatinnormalgroupandmyastheniagravisgroup（P<0.05）.Theconcentrationofpimelicacidinmitochondrialmyopathygroupandmyastheniagravisgroupweresignificantlylowerthanthoseinnormalgroup（P<0.05）.Theintra-dayRSDwas1.00%-2.84%，andtheinter-dayRSDwas2.01%-3.87%.Theaveragerecoveryrateoftheaddedstandardwas88.47%-104.09%，andRSDwas1.24%-4.19%.ConclusionThemethodofgaschromatography-massspectrometryfordeterminationofurinarydicarboxylicacidorganicacidcompoundsissimple，accurate，withgoodreproducibility，whichcanbeusedtohelpscreeningcarnitinecirculatingenzymedeficiencyinheritedmetabolicdiseasesinclinic.[Keywords]Dicarboxylicacid；Gaschromatography-massspectrometry；Mitochondrialmyopathy；Myastheniagravis；Urine随着1966年K-Tanak首先将气相色谱-质谱（gaschromatography-massspectrometry，GC/MS）联用技术应用于遗传代谢病检测后，已在欧美等国家得到广泛应用，尿液中有机酸的异常升高或异常有机酸的出现，往往与体内这些化合物代谢的紊乱有关，其中某些有机酸异常的变化可为遗传代谢性疾病[1-4]，在遗传代谢病中肉碱循环酶缺陷影响长链脂肪酸转运，以尿中无二羧酸类代谢物为其特征，因此准确检测尿液中二羧酸类有机酸含量，对于帮助遗传代谢病筛查诊断具有重要应用价值。尿液样品的前处理有有机酸萃取法和尿素酶法，前者主要应用于欧美国家，使用年限较长，后者是近几年由日本学者建立，经尿素酶处理后，不经有机溶剂萃取直接进行GC/MS分析，但未经有机溶剂萃取的气相色谱图的杂峰甚多，不利结果分析，且无法定量检测到脂肪二羧酸类代谢物，本研究是对尿液前处理进行改进，使得有机二羧酸类化合物提取与甲酯化在一个体系同步进行，采用GC/MS联用方法测定样本中己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸的含量，现报道如下：1资料与方法1.1样品45名健康人（正常组）来自福建省医学科学研究院职工和福建医科大学学生，其中男21名，女24名，年龄20～60岁。无低血糖病史，无肝、肾、脑疾病病史，无严重感染病史，无代谢性疾病病史，无心电图和脑电图异常。6例线粒体肌病患者（线粒体肌病组）为2013年6月～2017年3月福建省附属第一医院的患者，经过基因检测确诊，其中男3例，女3例，年龄9～48岁。重症肌无力12例患者（重症肌无力组）为福建省立医院2016年6月～2017年6月的就诊患者，其中男9例，女3例，年龄21～64岁。遵循程序符合人体试验委员会制订的伦理标准，获得研究对象同意，自愿签署知情同意书。1.2仪器与试剂Agile...