铁皮石斛愈伤组织稳定培养体系的建立摘要：为了建立稳定的铁皮石斛愈伤组织培养体系，试验开展了铁皮石斛愈伤组织最佳外植体类型、诱导培养基配方以及继代培养基配方的筛选等研究。结果表明，采用铁皮石斛茎段为外植体，愈伤组织诱导效果最好；初步诱导出的愈伤组织在MS+2mg•L-lKT+2mg•L-l2,4-D+O.2mg•L-lNAA的培养基上能够诱导生长速度快、质地硬、结构松散的理想愈伤组织；经过筛选的愈伤组织在MS+O.5mg•L-lKT+1mg•L-l2,4-D的培养基上进行继代培养，愈伤组织可以长时间保持理想状态。关键词：铁皮石斛；培养基；愈伤组织；激素中图分类号：S682.31文献标识码：ADOI编码:10.3969/j.issn.1006-6500.2018.08.016Abstract：InordertoestablishastablecallusculturesystemofD・candidum,theoptimalexplanttype,callusinductionmediumformula,andsubculturemediumformulawerestudiedandscreened・TheresultsshowedthatusingthestemsofD.candidumasexplantshadthebestcallusinductioneffect；themediumMS+2mg•L~1KT+2mg•L~12.4-D+O.2mg•L~1NAAcouldinducetheidealcalluswithfastgrowthrate,hardtextureandloosestructure；thesubculturemediumMS+0.5mg•LTKT+1mg•LT2,4~Dcouldremaintheinductedidealcallusaboveforalongtime.Keywords:Dendrobiumcandidum；medium；callus；hormone我国是中草药生产的大国，近年来，由于土地资源的限制和环境变化，导致一些中草药生产受到了严重影响，随着人们对中草药有效成分的认识，越来越多的研究集中在中药有效成分的提取和生产上，这也是中药国际化的必然趋势[1-3]o利用植物愈伤组织进行次生代谢物的生产，在药用植物上越来越多。近年来，通过植物组织培养技术离体生产药用植物的有效成分逐渐受到重视[4-7]o采用愈伤组织进行生物制药的研究已经成为药用植物离体生产的主流，其主要优势有：第一，愈伤组织生长速度快，在短时间内获得大量的细胞，从而获取更多的药用成分；第二，愈伤组织容易诱导，而且易于体外控制,可以在离体条件下改变培养基成分，生产出更多的药用成分；第三，愈伤组织的培养成本较低；第四，可以利用愈伤组织进行离体诱变，选育产量高的细胞株系。目前，愈伤组织在次生代谢物生产中已经得到广泛应用，在未来生物制药领域必将发挥其重要作用。本研究通过诱导铁皮石斛外植体产生生长稳定、组织形态理想的愈伤组织，目的是利用这类愈伤组织进行一定的科学研究或利用愈伤组织培养生产有效药物成分，为生物制药的发展奠定基础。1材料和方法1.1试验材料研究所用铁皮石斛组培苗由天津农学院园林植物实验室提供。1.2试验方法1.2.1铁皮石斛愈伤组织诱导最佳外植体的筛选本试验釆用铁皮石斛组培苗的不同组织部位作为外植体，进行愈伤组织的诱导，筛选出愈伤组织诱导效果最好的外植体类型。剪取铁皮石斛组培苗，在超净台中将叶片、茎段和根剪下,造成两端都有伤口的外植体，其中叶片剪掉叶尖，茎段不带腋芽，根剪掉根尖。将剪好的外植体接种到提前准备的MS+2mg-L-12,4-D+30g-L-1蔗糖培养基上诱导愈伤组织。将接种好的三角瓶放到组培室中进行培养。培养条件：温度25°C,24h连续光照，光照强度1000lxo接种后每天观察外植体伤口部位的变化和外植体的生长情况，60d时记录愈伤组织诱导情况。1.2.2不同激素对铁皮石斛愈伤组织诱导的影响根据1.2.1试验结果显示，茎段诱导的愈伤组织最好，为进一步获得结构松散、质地较硬的理想愈伤组织类型，本试验采用含有不同激素的培养基进行愈伤组织再次诱导，筛选出愈伤组织形态和生长速度最好的培养基配方。取铁皮石斛组培苗茎段诱导出的愈伤组织，将其分割成直径2〜3mm的小块，分别接种到事先配制好的愈伤组织诱导培养基上。培养基为MS基本培养基，附加不同浓度的BA、KT、NAA和2,4-Do培养条件与1.2.1相同。1.2.3不同激素石斛愈伤组织稳定生长的影响为了使1.2.2试验中获得的结构松散、质地较硬、生长快速的愈伤组织长时间保持原有状态和继代生长，本试验选用不同培养基，对愈伤组织进行继代培养，筛选出适宜铁皮石斛愈伤组织稳定生长的培养基。选取1.2.2中诱导岀的铁皮石斛理想的愈伤组织类型，在...