酿造工业用果胶酶、纤维素酶生产菌的选育研究谷海先，王建（江南大学生物工程学院，江苏无锡214036）关键词：黑曲福:诱变育种;固态发酵:果胶酶;纤维素酶摘要:该文以腐败香蕉等水果和各酒厂的大曲作为菌源，经筛选获得的黑曲袜563具有同时产果胶隽和纤维素詢的能力。再经紫外线诱变得到FV4菊株，在軼皮:玉米芯=5:5、1%果胶溶液的培养基中于33Y条件下培养5d・果胶隽活力达到3750U/g（干基），纤维素酵活力达到!800U/g（干基）.中图分类号:TS2OL3文itt标识码:B文章编号：0254-5071（2004）01-0011-04StudyonScreeningandCultivationofPectinase-.Cellulase-producingStrainsinBrewingIndustryGUHaivxian,WANGJian（SchoolofBiotechnology,SouthernYangtzeUniversity.Wuxi,Jiangsu214036,China）Keywords:Aspergillusniger;strainselectionbymutation;solid-statefermentation;pectinase;cellulaseAbstract:TherottenfruitssuchasbananasandDaqu（koji）fromwineplantsweretakenassourcestrains.TheobtainedAspergillusniger563strainhadtheabilitytoproducepectinaseandcellulase・ThemutantFV-4obtainedthroughultravioletmutagenesiswascultivatedat33Pfor5dinthemediumcontainingbranandcobattheratioof5:5,aswellas1%pectinsolution.Theresultshowedthattheactivityofpeptinaseandcellulasereached3750U/g（drybasis）and1800U/g（diybasis）,respectively・植物纤维素作为细胞壁的主要结构成分存在于所有的植物中，它是一种均匀葡聚糖，由（1,4）・B・D・毗喃葡萄糖基单位的直链所组成⑴。果胶物质主要由（1,4）・a・D・毗喃半乳糖醛酸基单位组成的高聚物，它们存在于细胞壁的中间层叭酿造工业中的原料都是利用植物的淀粉和蛋白质，为了经济的原因都是将原料粉碎后直接利用，而不是从植物中先提取出淀粉或蛋白质再利用,这样往往会使淀粉或蛋白质利用不完全。采用果胶酶和纤维素酶复合可以将植物的细胞壁破碎，从而使得壁内物质充分释放出来叫这在果蔬汁饮料加工业中已得到应用。因此，在酿造工业中采用果胶酶和纤维素酶等复合酶制剂将会缩短发酵周期，提高原料利用率。本文从各种曲中筛得黑曲霉563,具有产生果胶酶和纤维素酶的能力，并以此为出发菌株，经紫外线诱变获得菌株FV・4,经发酵条件优化，果胶酶活力最高达到3750U/g,纤维素酶活力达到1800U/g（本文所有酶活力均以绝干物质计）。1材料与方法1.1材料荻皮、豆饼、小麦等:无锡市调味品厂生产原料。高温曲、中温曲、低温曲：山东梁山县潍坊大曲总厂、江苏双沟以及安徽文王、剑南春等。酒药、玉米粉:超市购得。果胶:浙江衢州果胶有限公司出品。东酒1号菌种:上海酿造研究所。药品及试剂:购于上海化学试剂公司，均为分析纯。果胶:购于Sigma公司。12培养基试管斜面培养基：20%土豆•果胶培养基。液体试管培养基:含5%果胶的麦芽汁（麦汁浓度为2%）；5%果胶和1%花生饼粉。分离培养基:同试管斜面培养基。基础培养基:就皮2g,玉米芯2g,加1%果胶溶液。13实验方法将腐败的香蕉等水果样或大曲样加入到液体试管中，于32弋下培养。挑选最早使液体试管澄清分层的,从中分离菌株于平皿上，再移接于试管斜面培养基上。将基础培养基配好装于100mL三角瓶中，0.1MPa,12ir灭菌30min。然后接入一铲菌皮，于33七下培养5d后,测定酶活力大小。1.4分析方法pH测定:精密试纸。果胶酶活测定:QB1502-92o收犒日期：2003-06-30作者简介:谷海先（1949-）,男，江苏盐城人，高级工程师，副教授，主要从事酶技术的开发和应用工作。纤维素酶活测定:Q320201.JW007-1999.滤纸崩解法：将滤纸条加入L5mL缓冲溶液中，50七保温20min,加入0.5mL酶液，每隔一定时间观察滤纸崩解程度，最后统计滤纸完全消失所需的时间。2结果与讨论2.1黑曲霉563茵株的获得将各种样品在液体试管（共50支）中培养，第4天开始有变澄清的样品，第5天只有12支试管出现了分层，培养基变清，其中5支分层明显，十分澄清。通过划线法将5支试管中菌分离于平皿中，培养4d,挑选了40只单菌落，接于发酵基础培养基中，培养5d,测定果胶、纤维素酶酶活力，采用直接使用滤纸崩解的方法测定，选出3株菌进行复筛，...