人口腔粘膜上皮细胞的培养及生物学特性的研究实川口腔医学杂志2（X）0年第4期第16卷论著作者：丁桂聪毛天球杨维东陈富林赵晋龙陶凯单位：丁桂聪（第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科710032）；毛天球（第川军医大学口腔医学院口腔颌曲外科710032）；杨维东（第四军医大学口腔医学院口腔颌血外科710032）陈富林（第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科710032）；赵晋龙（第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科710032）；陶凯（第四军医大学口腔医学院口腔颌面外科710032）关键词：粘膜细胞培养；上皮组织细胞（摘要）目的：探讨口腔粘膜上皮细胞的培养扩增方法及生物学特性。方法：取手术中切除的多余粘膜，分别用胰酶和Dispase分离后经胰酶消化，接种无血清培养基。将二者细胞数最、活力及融合时间加以比较，同时对细胞各代增殖特点、生长曲线、克隆形成率及血清对细胞分化的煤响进行观察。结果：Dispase分离法的细胞总数，活细胞数均高于胰酶分离法。粘膜上皮细胞能够在无血清培养基稳定增殖传代，血清对上皮细胞有诱导分化作川。结论：Dispase分离的无血清培养技术可短期内获得大量具增殖能力的粘膜上皮细胞。中图分类号：R329.2%文献标识码：A文章编号：1001-3733（2000）04-0288-03AstudyofhumanoralmucosalepithelialcellcultureandcharacteristicsDingGuicong,MaoTianqiu.YangWeidong,etal.（DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery,StomatologicalCollege,FourthMilitaryMedicalUniversity,Xi*an,710032）（Abstract）Objective:Tostudytheoptimalprocedureforthecultureandamplificationoforalmucosalepithelialcells（OMEC）andtheirbiologicalcharacteristics.Methods:OMECwereprimarilyculturedwithtrypsinordispasedigestion.Thebiologicalcharacteristicsofthecellswereobservedthroughphasemicroscope,cellgrowthcurve,colonyformingefficiency.Results:Moreviablecellswereharvestedwithdispasedigestionandthecellsreachedconfluenceearlierthanwithtrypsindigestion.ThethirdpassageofOMECgrewwellinkeratinocyte-serumfreemedium（K-SFM）,OMECwereinducedtodifferentiatewhenserumexistedinmedium.Conclusion:AlargenumberofOMECmayobtainedwithdispasedigestionandthecellsgrowwellinK-SFM.KeywordsMucousmembrane;Cellcultivation;Epithelialcell.口腔颌面外科的肿瘤切除，创伤及修复前的牙槽外科往往有大面积口腔粘膜缺损。自体粘膜移植修父是更为符合口腔生理要求的方法，但组织来源有限，因而传统上多采用白体皮肤移植代替缺失的粘膜。皮肤移植修复口腔缺损的同时，存在肴明显的缺陷⑴。近年來发展起来的组织工稈技术为此问题的解决开辟了新的途径。通过体外表皮细胞人量扩增而合成的人工皮肤目前己成功地应用于烧伤患者。因而如何利用组织工稈方法合成粘膜来代替皮肤移植修复口腔粘膜，已引起学者的兴趣⑵。粘膜组织T稈首先要解决种子细胞来源，保证获得足量且纯化的上皮细胞，而该问题的解决关键是建立可靠的上皮细胞培养扩增技术，国内该方面的研究尚少口⑷。木研究目的是研究无血清培养条件下粘膜细胞的培养扩增方法及生物学特性，为粘膜的体外构建奠定基础。1材料和方法1.1材料人角航细胞培养液(K-SFM,Gibco),胰酶(Sigma),DMEM(Hyclone),DispaseII(Gibco),胎牛血清(浙江金华清湖犊牛利用研究所)。1.2方法1.2.1标本处理无菌条件下收集本院颌瓯外科手术中丢弃的多余粘膜，患者年龄2.5〜62岁。置于体积分数为10%血清的DMEM中。PBS洗净血迹，2.5g/L洗必泰液浸泡5〜8min,尽量去除粘膜下组织，并切成0.3cmxlcm大小的纟R织块。1.2.2标本分组每个标本分成相等两份，其中一份放入2.5g/LDispaseII溶液,4°C冰箱过夜；另一份则叠2.5g/L胰酶4°C冰箱过夜，两组分离时间相同。然后用眼科铁将表皮撕下，将两组的上皮分别用2.5g/L胰酶37°C消化5〜10min,DMEM(含血清)中止消化，吹打成单细胞液。血球板计算细胞数，台盼兰活细胞计数，以4x10°个/cn?的细胞密度接种于含K-SFM的25ml培养瓶中。1.3观测指标1.3.1倒置显微镜下观察各代细胞形态。1.3.2细胞计数及台盼兰活力...