结肠癌组织中microRNA含量检测的临床意义袁娅娟(第四军医大学第一附属医院检验科陕丙丙安710032)【摘要】目的：研宄并探讨结肠癌组织中microRNA含量及其临床意义。方法:选择结肠癌术中切除的结肠癌组织、癌旁组织以及远端正常的结肠组织标木,采用Stem-loopRT和realtime-PCR的方法检测以原癌基因和抑癌基因为靶点的microRNA的含量。结果:月中瘤组织中miR-7b、miR-143、miR145的含量明显低于正常结肠组织；相反，miR221和miR223的含量明显高于正常组织，并且TNM分期越差、miRNA含量变化越明显。结论：在结肠癌组织中miR-7b、miR-143、miR145含量明显减少、miR221和miR223的含量明显增加,并且miRNA的改变与肿瘤TNM分期密切相关。【关键词】结肠癌microRNATNM分期【中图分类号】R735.3+5【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)13-0256-02结肠癌是极为常见的消化道恶性肿瘤，并且发病率呈现逐年上升的趋势。结肠癌的发生和遗传、饮食、环境等多种因素引起的原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。MicroRNA是近些年来分子生物学和表观遗传学领域的研宄热点，它在体内发挥重要的生物学作用，参与细胞的增殖、分化、凋亡等过程。为了研宄microRNA在结肠癌组织中的含量及其对疾病的早期诊断的临床价值，笔者进行了如下研究。1.资料与方法1.1一般资料选择2007年3只-2014年3月在我院行手术切除治疗的260名结肠癌患者，TNM分期均在1I4V期。收集在术中切除的结肠癌组织、癌旁组织以及远端正常的结肠组织标木，立即投入液氮保存，以备后续Realtime-PCR检测。1.2检测方法采用Trizol法（invitrogen公司）抽提结肠组织中的兑mRNA、Stem-loopRTPCR的方法合成cDNA第一链。在miRBase中査找microRNA序列、并在stem-loop序歹ij5&rsquo;-gtcgtatccagtgcagggtccgaggtattcgcactggatacgacccttct-3&rsquo;的3&rsquo;端加上5-6个与0的microRNA序列3&rsquo;端完全互补配对的碱基作为RT-PCR的特异性引物。PCR扩增采用荧光定量PCR试剂盒（Takara公司），扩增条件:95。C、15s，60。C、30s，72。C、30s,40个循环。引物序列：U6:上游5&rsquo;-GCTTAGGCAGCACATATAC3*,下游5*-TTCACGAATTTGCGTGTCAT-3*；miRNA:上游5个G或C、加上15个3的miRNA序列（U变为T），下游引物采用固定序列5&rsquo;-GTGCAGGGTCCGAGGT-3&rsquo；c1.3含量分析方法分别扩增同一样本的0的基因和看家基因，利用其&Delta;Ct值进行相对定量。即用同组中每个样本B的基因的Ct值减去的U6的Ct值（&Delta;Ct），再用肿瘤组织中目的基因的&Delta;Ct减去正常组织的△ct（&Delta;&Delta;Ct）,代入公式2-&Delta;&Delta;Ct计算即得到肿瘤组织相对正常组织PCR产物的浓度比值，以此来反映microRNA含量的变化。1.4统计学方法采用SPSS18.0对所得数据进行统计学分析，均以P<0.05作为判断为具有统计学意义的标准。2.结果2.1不同结肠组织中microRNA含量（见表1）表1:肿瘤组织、癌旁组织和正常组织中microRNA含量比较2.2不同TNM分期肿瘤组织中microRNA含量（见表2）表2:不同TNM分期肿瘤组织中microRNA含量比较3.讨论microRNA是一类进化上保守的非编码小分子RNA,具有在翻译水平调控基因表达的功能。miRNA通过碱基互补的方式与目标mRNA结合，阻止所结合的mRNA的翻译，导致相砬基因表达水平的下降［1］。结肠癌作为消化道极为常见的恶性肿瘤，它的发生发展与原癌基因的激活和抑癌基因的失活密切相关。MicroRNA参与体内1/3以上基因表达的调控，其中就包括某些原癌基因和抑癌基因。当以原癌基因为靶向的microRNA含量下降吋、以抑癌基因为靶向的microRNA含量增加吋，就会导致原癌基因表达量增加和抑癌基因表达量减少，进而引起肿瘤的发生和发展［2】。体内与结肠癌发生发展相关的抑癌基因包括APC、PTEN、CDKN1C/p57,相关的原癌基因包括k-ras、erk、c-myc等［3】。通过Targetscan6.0查询可知，以这些原癌基因和抑癌基因为靶点的microRNA包括miR-7b、miR-143、miR145、miR221和miR223。目前，诊断结肠癌的主要方法是结肠镜和病理活检。由于疾病缺乏特异性的症状和体征，也没奋较为敏感的血液检查指标，这就使得结肠癌的早期诊断变得十分困难。为了探索和研究对于结肠癌的早...