集菌涂片一步法检测脑脊液抗酸杆菌实验诊断结核性脑膜炎邢然1袁文丽2（1.河北省围场县医院检验科;2.河北省围场县医院急诊科围场068450）【屮图分类号】R446.14【文献标识码】B【文章编号】1008-6455（2010）10-0352-01随着结核病发病率的提高，结核性脑膜炎（结脑）病例在临床也不断增多。目前，结脑病例呈常年发病、不典型表现病例增多、各年龄组均有分布等特点，其屮以不典型的临床表现和不典型的脑脊液（CSF）实验室检查结果增多为突出特点。由于结脑的临床表现和CSF检测结果均呈不典型化变化，使临床诊断结脑的难度进一步增人。结脑仍然是结核病屮死亡率和致死率最高的病种，而降低其死亡率和致死率唯一有效的方法就是及时确认和及时治疗。临床诊断结脑在很人程度上依靠实验室资料，但由于常规实验室方法诊断结脑的敏感性低（10-40%左右），难以满足诊断结脑的需要。因此，进一步研究特异、灵敏、实用的实验诊断结脑的方法，具有重要的临床实用意义。研宂提示，集菌涂片一步法（一步法）能够显著地提高抗酸杆菌（AFB）的检出率。1材料与方法1.1对象:所检测的对象，均为临床确认的病例，共165例，年龄2-70岁男86例，女79例。其屮，结脑患者115例（结脑组）；对照组50例，包括病毒性脑膜炎患者30例、非结核性细菌性脑膜炎患者12例、新型隐球菌性脑膜炎8例。所有对象经过临床诊断、实验室诊断、影像学诊断、临床治疗评价等而最终确诊。1.2方法:采集CSF为检测标本。对第一份CSF标本，平行进行培养结核杆菌、常规法检测AFB、一步法检测AFB，比较各种方法的特异性和阳性率。1.2.1培养结核杆菌:应用改良罗氏法,按《结核病诊断细菌学检验规程》有关操作规程进行。试剂制。1.2.2常规法检测AFB:应用CSF沉渣涂片、萋-纳氏抗酸染色法检测AFB,试剂自制，按《结核病诊断细菌学检验规程》有关操作规程进行。1.2.3一步法检测AFB:此法检测CSB标本AFB实验分为3个步骤:首先，进行“玻片直接离心集菌涂片”步骤：取CSFl-5ml（根据CSF细胞数，摸索CSF用量，一般使用3ml可以满足检测需要），于CSF细胞离心涂片器（本实验砬用第四军医大学生产的FMU-5型仪器）中用500rpm条件将液体全部离心甩干，进行CSF的离心集菌涂片。此吋可将CSF内的全部有形成分集聚在载玻片上直径约为0.8cm的范围内。如此操作可以将常规方法的“离心集菌”和“手工涂片”两个操作步骤用一个步骤完成。其次，进行抗酸染色（同常规法）。第三，检査AFB：在显微镜的汕镜下检测全部样本区。1.3统计学方法:应用卡方检验进行统计学分析，以P<0.05为具有统计学意义界限。2结果CSF标本各指标检测结果，见表1。检测结果显示：培养法仅有5份CSF有结核杆菌生长，常规法仅有16份CSF检测到AFB阳性结果；而这些阳性标本，应用离心涂片一步法均得到AFB阳性结果。对照组无阳性发现，特异性均为100%。统计学结果显示：离心涂片一步法的阳性率明显高于培养结核杆菌和常规法检测AFB,差别均具冇统计学意义（配对卡方检验，x2=67.01-56.02,P<0.001）。表1CSF标本各指标检测阳性结果n（%）3讨论CSF能够直接反映中枢神经系统病理变化，是实验诊断结脑的理想标本。如果在CSF中检测出结核杆菌及其特异性标志物、某些与结脑密切相关的标志物或指标等，则能够为临床诊断结脑提供诊断依据。其中，结核杆菌、AFB等被认为是实验诊断结脑的较好指标，也是临床常用的指标。一般认为，实验诊断结脑“金指标”是于CSF中培养出结核杆菌或检测出AFB,因此CSF标本培养结核杆菌和检测AFB是实验诊断结脑的常规方法。但因方法学的缺陷，常规检测CSF中AFB方法的敏感很低，一般只能达到14-40%左右的阳性率；培养结核杆菌也存在周期长（3-5周）、阳性率低（10%）左右等问题。本实验，培养结核杆菌的阳性率为4.3%,常规检测AFB的阳性率为13.9%。这样的阳性率显然不能满足诊断结脑的需要。尽管奋很多诊断结脑的方法不断问世，但因存在着某些问题或缺陷而引起不同程度的质疑，多不如AFB直接、客观和被公认。检测CSF标本AFB，是实验诊断结脑特异性指标和常规指标之一，但常规方法的敏感性较低，不能满足实际需要。实验显示，应用集菌涂片一步法检测CSF标本AFB特异性为100%、敏感性为...