SSR法鉴定水稻两系杂交种纯度应用及探析III。两个形态学差异较大品种间掺杂回收试摘要：在两系杂交稻两优培九的大群体田间纯度鉴定中，定向掺入形态学差异较大的两系杂交稻新两优6380，逐株抽取田间植株叶片样品，运用SSR法进行鉴定。结果表明，运用SSR法能够准确地检测出掺入的新两优6380。在室内检测的谱带中发现，新两优6380的带型与两优培九不育系带型的位置相同。关键词：两系杂交稻；大群体；掺杂回收；带型比对：S511；Q789文献标识码：A文章编号：0439-8114(2012)18-3941-02StudyonDetectionofSeedPurityofTwo—LineHybridRicebySimpleSequenceRepeat(SSR)III.AdulterationandRecoveryExperimentsbetweenTwoDifferentVarietiesLIAOFang-1i1,LINMei1,ZHANGYu-fei1,ZHAOHong1,XIONGXian-fengl,ZHANGKai2,TUShu—xin3(1.SeedManagementBureauofJingzhouCityinHubeiProvince,Jingzhou434020,Hubei,China；2.AgricuIturalCo1lege,YangtzeUniversity,Jingzhou434025,Hubei,China；3.HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,China)Abstract：Thegroupsseedspurityoftwo—1inehybridricevarietyLiangyoupei9adulteratedanotherdifferentvarietyXinliangyou6380wasdetectedthroughexterminatingleaveswiththemethodofSSR・Theresu1tsshowedthatXinliangyou6380adulteratedcouldberecognizedexact1y.ThesamelanebetweenXinliangyou6380andLiangyoupei9sterile1inewasobservedduringdetectioninthelaboratory・Keywords：two—1inehybridrice；alargegroup；aduIterationandrecovery；lanea1ignment由于DNA提取方法的简化、琼脂糖凝胶电泳技术的运用，以及SSR分子标记鉴定两系杂交水稻种子纯度具有快速、重复性好、多态性高等优点，使得SSR法成为目前室内鉴定两系杂交水稻种子纯度时应用最为广泛的分子标记方法［1一6］。但是琼脂糖凝胶电泳成像的谱带分辨率低,信息量不充分，谱带的主带一般表现为不育系、恢复系和杂交种3种类型，不能区分不同的杂株类型。为验证该方法的可靠性和准确性，前人的研究一般是在鉴定时，采取人为在鉴定样品中掺入该组合的恢复系、保持系、不育系的方法来检验［7—9］。但在田间正季种植鉴定条件下，用两系杂交水稻种子大群体定位掺杂回收，且对掺入的杂交种子杂株谱带特征的研究目前鲜有报道［10—13］o此次研究的目的在于了解单对引物对亲缘关系较远的品种的识别率，验证单对引物SSR法测定亲缘较远的两系杂交水稻种子纯度的准确性和可靠性，同时探讨样品中混入其他杂交种的谱带特征。1材料与方法1.1材料试验材料是在通过系谱比较后，选用遗传背景不同、亲缘关系较远的两优培九(培矮64SX9311)和新两优6380(03SXD208)两个品种。这两个品种由荆州市种子管理局从市场上抽取商品种子，并经生产企业确认。所用引物及试剂均由北京鼎国生物有限公司提供。1.2PCR反应体系PCR扩增反应总体积10HL：10Xbuffer1uL,10mmo1/LdNTP0.2uL,50ng/uLprimer0.2uL+0.2uL,2U/uLTaq酶0.6uL,25ng/nLDNA1uL,ddH2O6.8nLoPCR反应条件为：94°C预变性4min；然后进行35个循环的扩增，循环参数为94°C.15s,55°C.15s,72°C.30s;最后在72°C下延伸7mino扩增产物在含EB的3%琼脂糖凝胶中进行电泳后，应用凝胶成像系统观察记录。1.3掺杂和抽样方法试验于2011年4月15日播种，5月15日移栽。小区单本栽植500株苗，50行，每行10株，行距26.7cm,株距16.7cm。每个植株用4位数编号，前两位数表示所在的行数，后两位数表示所在行的位置,例如0508表示第5行的第8株。在两优培九田间鉴定移栽时，每隔9株混栽1株新两优6380o两个品种之间的植株特征特性差别较大，易于田间识别（表1）；同时两个品种之间的遗传背景差异较大，易于室内检出。返青后按对应编号采取田间各植株的倒二叶叶片，用RM11对两优培九进行室内分子检测，为了防止人为因素干扰，试验过程中将掺杂、田间鉴定和室内SSR检测的操作分别由3批不同的专业人员独立完成。1.4结果比对在抽穗前及齐穗后分两次按GB/T3543.5-1995进行田间纯度鉴定，并将田间结果与室内SSR法的纯度检出结果进行比对，验证室内与田间结果的一致性。