电泳技术简介电泳法，是指带电荷的供试甜（蛋白质、核廿酸等）在惰性支持介质（如纸、醋酸纤维索、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等）中,于电场的作用下，向其对应的电极方向按各自的速度进行泳动，使组分分离成狭窄的区带，川适宜的检测方法记录其电泳区带图谱或计算其右分含量的方法。电泳技术的基本原理和分类在电场中，推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。F=QE质点的前移同样要受到阻力（F）的影响，对于一个球形质点，服从Stoke定律,即：「=6nrnv式中「为质点半径，耳为介质粘度，v为质点移动速度，当质点在电场中作稳定运动时：F=F/即QE=6nrriv可见，球形质点的迁移率，背先取决于自身状态，即与所带电量成正比，与其半径及介质粘度成反比。除了自身状态的因索外，电泳体系中其它因索也影响质点的电泳迁移率。电泳法可分为自山电泳（无支持体）及区带电泳（有支持体）两大类。前者包括Tise-leas式微量电泳、显微电泳、等电聚焦电泳、等速电泳及密度梯度电泳。区带电泳则包括滤纸电泳（常压及高压）、薄层电泳（薄膜及薄板）、凝胶电泳（琼脂、琼脂糖、淀粉胶、聚丙烯酰胺凝胶）等。自山电泳法的发展并不迅速，因为其电泳仪构造复杂、体积庞大，操作要求严格，价格昂贵等。而区带电泳可用各种类型的物质作支持体，其应用比较广泛。本节仅对常用的儿种区带电泳分别加以叙述。影响电泳迁移率的因素1•电场强度电场强度是指单位长度（cm）的电位降，也称电势梯度。如以滤纸作支持物,其两端浸入到电极液中，电极液与滤纸交界面的纸长为20cm，测得的电位降为200V,那么电场强度为200V/20cm=10V/cmo当电压在500V以下，电场强度在2-10v/cm时为常压电泳。电压在500V以上，电场强度在20-200V/Cm时为髙压电泳。电场强度大，带电质点的迁移率加速，因此省时，但因产生大量热量，应配备冷却装置以维持恒温。2.溶液的pH值溶液的pH决定被分离物质的解离程度和质点的带电性质及所带净电荷量。例如蛋白质分子，它是既有酸性基团（-COOH）,乂冇碱性基团（限出）的两性电解质，在某一溶液中所带正负电荷相等，即分子的净电荷等于零，此时，蛋白质在电场中不再移动，溶液的这一pH值为该蛋白质的等电点（isoelctricpoint,pl）。若溶液pH处于等电点酸侧，即pH<pl,则蛋门质带正电荷，在电场中向负极移动。若溶液pH处于等电点碱侧，即pH>pl,则蛋白质带负电荷，向正极移动。溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移率越大。因此在电泳时，应根据样品性质，选择合适的pH值缓冲液。3•溶液的离子强度电泳液中的离子浓度增加时会引起质点迁移率的降低。其原因是带电质点吸引相反符合的离了聚集其周围，形成一,个与运动质点符合相反的离了氛(ionicatmosphere),离子氛不仅降低质点的带电量，同时增加质点前移的阻力，甚至使其不能泳动。然而离子浓度过低，会降低缓冲液的总浓度及缓冲容量，不易维持溶液的pH值，影响质点的带电量，改变泳动速度。离子的这种障碍效应与其浓度和价数相关。可用离子强度I表示。4•电渗在电场作用卜液体对于尚体支持物的相对移动称为电渗(electroosmosis)。其产生的原因是固体支持物多孔，且带仃可解离的化学基团，因此常吸附溶液中的正离了或负离了,使溶液相对带负电或正电。如以滤纸作支持物时，纸上纤维素吸附0"带负电荷，与纸接触的水溶液因产生H3OS带正电荷移向负极，若质点原来在电场中移向负极，结果质点的表现速度比其I古I有速度要快，若质点原来移向正极，表现速度比其尚冇速度要慢，可见应尽可能选择低电渗作用的支持物以减少电渗的影响。电泳分析常用方法(醋酸纤维素薄膜电泳醋酸纤维索是提纤维索的梵苹乙酰化形成的纤维索醋酸酯。山该物质制成的薄膜称为醋酸纤维索薄膜。这种薄膜对蛋□质样品吸附性小，儿乎能完全消除纸电泳中出现的"拖尾”现象，乂因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分山样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5ug的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。醋酸纤维索膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化...