AQP-1在原发性青光眼眼组织中的作用尹晓峰1唐瑜2杨芳2汪晓晨2李静敏2（通讯作者）（1辽宁省大连市旅顺口区人民医院辽宁大连116041）（2辽宁省大连市医科大学附属第二医院辽宁大连116041）【摘要】目的通过检测水通道蛋白-1（Aquaporins-1,AQP-1）在原发性青光眼患者小梁和虹膜组织中的表达水平，探讨水通道蛋白-1与房水分泌、排出的关系以及作用机制。方法实验组（A1）为原发性闭角型青光眼（PACG）患者小梁切除术中留取的小梁、虹膜组织；高眼压对照组（A2）为原发性开角型青光眼（POAG）患者小梁切除术中留取的小梁、虹膜组织；正常眼压对照组（B组）为外伤摘除的正常眼压眼球中切除的小梁、虹膜组织，进行HE染色和免疫组化实验检查，检测出各组的小梁及虹膜组织中AQP-1的表达水平及细胞形态方面的变化，进行比较和分析。结果（1）HE组中A1组、A2组对比B组中内皮细胞数量减少，纤维结缔组织增生，色素细胞层次减少，基质中血管扩张充血明显，比较差异有显著性意义（P<0.01）、Al组与A2组的比较无显著性意义（P〉0.05）。（2）免疫组化中A1组、A2组对比B组中AQP-1的表达减少，A1组与A2组的比较无显著性意义（P〉0.05）。结论1.AQP-1在原发性青光眼组小梁组织中表达减少和正常眼球对照组中的表达存在差异。2.AQP-1与房水的分泌、排出相关，提示AQP-1可能与原发性青光眼发病机理相关。【关键词】水通道蛋白-1（AQP-1）青光眼小梁网AQP-1调控【中图分类号】R775.2【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）03-0017-02青光眼是位居全球第二位的致盲性眼病，病理性眼压升高是造成原发性青光眼视神经损害的主要危险因素，而眼压的改变与房水的产生、循环有着直接的关系。水通道蛋白（Aquaporins,AQPS）目前已经证明，参与房水的分泌与重吸收，探讨AQP-1在患者眼部组织中的作用机制有利于寻找相关致病因素，科学地掌握其发生发展规律，对青光眼的诊断、治疗和防盲治盲工作的开展具奋积极而深远的意义。1材料和方法1.1一般资料1.1.1研究对象选自2012年11月-2013年3月间大连医科大学附属第二医院眼科住院患者,将原发性闭角型青光眼作为实验组（A1组：25例，25眼），原发性开角型青光眼组织作为高眼压对照组（A2组：6例，10眼），外伤摘除眼球组织为正常对照组（B组：4例，4眼）。1.1.2入选标准A1组及A2组：1.符合《眼科学》原发性闭角型、开角型青光眼诊断标准［2］。2.具冇小梁切除术的适应症者。B组：外伤眼球摘除者，无青光眼等眼部疾病史和可引起AQPS表达异常的全身性疾病史。各组均已排除全身各系统疾病如肿瘤、肝硬化、肾脏疾病等可以影响AQP-1表达水平因素的疾病。1.2方法1.2.1主要试剂：一抗为AQP-1Antibody（美国），二抗为兔SP免疫组化试剂盒（北京中杉金桥），DAB显色试剂盒（北京中杉金桥）。主要设备由人连医科人学附属第二医院中心实验室提供。1.2.2实验室检查方法将原发性青光眼患者小梁切除术中切除的l&times;3mm大小的小梁组织和宽基底全层切除的虹膜组织及从正常眼球中切除的同样大小的小梁、虹膜组织进行石蜡包埋、切片、脱蜡，于3%H2O2去离子水中孵育5-lOmin,清除内源性过氧化氢酶活性。PBS冲洗9-10min。滴加正常山羊血清工作液室温孵育10-15,倾去。滴加适当比例稀释的一抗，4°C过夜。PBS冲洗9-10min。2-8°C暗处保存，滴加生物素化二抗工作液，室温孵育10-15min，PBS冲洗9-10min,滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，室温孵育10-15min,PBS冲洗9-10min，DAB显色剂显色，自来水充分冲洗，封片剂封片。1.2.3主要观察指标各组中虹膜、小梁细胞形态改变和AQP-1的表达水平。1.2.4统计学方法采用IPP6.0分析处理图像，测量各组标本AQP-1的灰度值，以P<0.05为差异具有统计学意义，利用SPSS17.0对数据进行统计分析。2结果2.1光镜下观察AQP-1免疫组化染色切片，细胞中出现棕色颗粒为阳性，反之为阴性，棕色颗粒颜色越深，阳性强度越人。(1)正常眼和青光眼虹膜上皮和基质中均呈强阳性染色，但部分急性闭角型青光眼患者标本有差异，染色较弱。图4A1组小梁SP染色图5A2组小梁SP染色图6B组小梁SP染色2.2统计学结果A1组小梁(x-&plusmn;s)为143.5672&plusmn;6.95888,A2组小梁(x-&plusm...