70AnhuiAgri.Sci.Bull.2010，16（11）安徽农学通报，紫外线诱变选育酸性α－淀粉酶高产菌株游玟娟（湖南化工职业技术学院，湖南株洲412004）摘要：研究了紫外线处理对枯草芽孢杆菌BF7658产酸性α－淀粉酶的影响。结果表明：采用30W紫外线照射90s获得较好的突变效果；利用变色圈法初筛结合摇瓶发酵复筛，筛选得到1株理想的突变株UV－12，其酶活为3418.8U/mL“”，抗性。比出发菌株提高了59.7%；对UV－12进行紫外线二次诱变，酶活提高不显著，表现出一定的关键词：枯草芽孢杆菌；酸性α－淀粉酶；紫外线；诱变中图分类号S335文献标识码A文章编号1007－7731（2010）11－70－02ScreeningofHighAcid－stableα－amylaseProducingStrainsbyUVYouWenjuan（HunanChemicalIndustryVocationalTechnologyInstitute，Zhuzhou412004，China）Abstract：TheUVmutagenesisinfluencedonacid－stableα－amylaseyieldfromtheproducingstrainBacillussubtilisBF7658hasbeenstudied.Theresultsshowedthattheoptimalconditionswasirradiated90swith30WUV.Ahighandsta-bleyieldmutantwasachievedbyScreenedwithdiscoloredzoneandfermentedinshakeflask，andnamedUN－12.Theacid－stableα－amylaseactivityofUN－12was3418.8U/mL，whichincreased59.7%comparedwiththeoriginalstrain.Theα－amylaseactivityofUN－12increasedalittlebysecondaryUVtreatment.Keywords：Bacillussubtilis；Acid－stableα－amylase；UV；Mutagenesis酸性α－淀粉酶能在酸性pH条件下，以随机方式切4葡萄糖苷键，断淀粉分子内的α－1，将淀粉水解为麦芽6键的糊精糖、低聚糖、含α－1，［1］1.3培养基（1）牛肉膏蛋白胨斜面培养基［6］；（2）固体鉴别培养基：可溶性淀粉5.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，pH7.0，琼脂10.0g，水1000mL；（3）液体发酵培养Na2HPO4·12H2O基：可溶性淀粉10.0g，蛋白胨5.0g，4.0g，KH2PO40.3g，pH7.0，水1000mL。1.41.4.11.4.2实验方法菌种活化菌悬液制备将枯草芽孢杆菌接种到固体斜面培养取活化后的菌种2环于盛有100mL。酸性α－淀粉酶的优点是能在酸性条件下发挥催化作用，从而实现淀粉同步液简化淀粉的加工工艺，降低产品的加工成本。化与糖化，因此它在淀粉深加工、酒精、食品、饲料、医药等领域有广泛的应用前景霉［4］［2－3］。目前酸性α－淀粉酶大多来源于微生物，产酸性α－淀粉酶的微生物主要是芽孢杆菌和曲。国外已有利用黑曲霉发酵生产酸性α－淀粉酶的，但我国尚未实现耐酸性α－淀粉酶工业化。本实报道［5］基上，放入培养箱中于37℃培养24h，即得活化菌株。无菌水的三角瓶中，加入无菌玻璃珠并置摇床上振荡6820min，配成10～10个/mL的菌悬液。验以枯草芽孢杆菌BF7658为出发菌株，进行紫外线诱变育种，旨在探索诱变条件，提高菌株产酶能力，为实现酸性α－淀粉酶工业化生产奠定基础。1.4.3紫外线诱变及筛选各取5mL菌悬液移入18个置于距30W紫外灯30cm处的磁力搅拌器无菌培养皿中，上照射1min，然后打开皿盖并开启磁力搅拌器，分别照射0s（对照用）、50s、60s、70s、80s、90s、100s、110s、120s（各做2组）。在暗光条件下，分别取经紫外线诱变的菌悬液0.1mL涂布于18个固体鉴别培养基上，倒置于37℃恒温培养箱中避光培养36h，计算致死率。喷洒碘液后，挑选进单菌落变色圈直径与菌落直径比值H/C≥2.0的菌株，行摇瓶发酵实验，测定其产酶能力。1.4.4酶活力测定酶活力的测定采用DNS法［7］1.11.2材料和方法菌株枯草芽孢杆菌BF7658，由本校生物制药国家QYC.2102摇床：上海福玛实验设重点实训基地保藏。主要仪器和设备备有限公司；VIS－7220分光光度计：北京瑞利分析仪器有限公司；CBV－1500A超净工作台：上海瑞仰净化装备有限公司；HPS－250生化培养箱：哈尔滨东明医疗仪器厂；LDZ4－0.8A离心机：北京医用离心机厂；HH.SYH－Ni2－C水浴锅：北京长源实验设备厂。。pH5.5条件下，1min内从可溶性酶活单位定义：在50℃，收稿日期：2010－04－08作者简介：游玟娟（1981－），女，湖南通道人，助教，本科，研究方向：微生物遗传育种。16卷11期游玟娟紫外线诱变选育酸性α－淀粉酶高产菌株表2菌株...