壳聚糖对白血病细胞糖基转移酶表达的影响及对细胞的抑制作用【摘要】目的：观察壳聚糖对白血病细胞（K562,SHI1）的作用。方法：以不同浓度的壳聚糖处理白血病细胞K562后，运用RTPCR方法检测实验组K562细胞中多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2（ppGalNAcT2）mRNA表达差异。另用不同浓度的壳聚糖分别作用于白血病K562细胞和SHI1细胞，MTT法检测壳聚糖对两种细胞的相对抑制率。结果：与阴性对照组比较，实验组K562细胞的ppGalNAcT2表达降低，且随壳聚糖浓度升高，表达量进一步减少；MTT实验显示不同浓度的壳聚糖对K562细胞和SHI1细胞均有抑制作用，并呈浓度依赖性。结论：壳聚糖对肿瘤细胞有一定的抑制作用，同时还可以减少ppGalNAcT2在mRNA水平的表达。【关键词】多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2；壳聚糖；RTPCR；白血病细胞［Abstract］Objective:Toobservetheeffectofchitosanonleukemiacells(K562,SHI1).Methods：Theleukemiacellsweretreatedbydifferentconcentrationofchitosan.TheexpressionofppGalNAcT2onK562cellsweredeterminedbyRTPCRmethod.Theleukemiacellsweretreatedbydifferentconcentrationofchitosan，andtherelativeinhibitionratewasdeterminedbyMTTassay.Results：Withaddingthechitosantocomparewiththenegativegroup,theexpressionofppGalNAcT2intheexperimentalgroupK562cellsreduced,andhadtheinverseratiowiththechitosan′sconcentration.IntheMTTassay,thechitosanwithvariousconcentrationshadtheinhibitoryactionontheK562cellsandtheSHI1cells.Conclusion：ThechitosansuppressedtheK562cellsandtheSHI1cellsmultiplication,anditsactionadvancedalongwiththeconcentration.ChitosaninfluencedtheexpressionofppGalNAcT2inleukemiacellK562reduceditsexpressionquantity.［Keywords］ppGalNAcT2;chitosan;RTPCR;leukaemiacell壳聚糖［化学名：β（1，4）N乙酰D葡萄糖胺］是甲壳素（chitin）经脱乙酰化得到的产物，又名甲壳胺、脱乙酰壳多糖等，是天然多糖中唯一的碱性多糖，具有良好的生物相容性和生物可降解性，在体内能被溶菌酶等降解，降解产物能完全被人体吸收，无毒副作用［1］。近年研究表明壳聚糖及其衍生物有抗肿瘤和增强机体免疫功能作用。杜昱光等［2］发现壳寡糖在体外可抑制肝癌、宫颈癌、白血病和S180腹水癌等多种癌细胞的生长，并抑制肿瘤细胞的DNA合成，在体内壳寡糖可抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长，并延长其生存期。---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---本实验以慢性髓源性白血病细胞K562的多肽：N乙酰氨基半乳糖转移酶2（ploypeptide：Nacetylgalactosaminyltransferase2，ppGalNAcT2）作为研究对象，对不同浓度壳聚糖作用48h后的白血病细胞ppGalNAcT2的mRNA表达变化进行探索，同时利用MTT法检测壳聚糖对K562和急性单核细胞白血病细胞SHI1的相对抑制率，为壳聚糖作为抗肿瘤辅助药物提供依据。1材料与方法1.1材料壳聚糖胶囊由中科院大连化学物理研究所馈赠，RPMI1640培养基为美国Gibco产品，TaqDNA聚合酶,dNTPMIX为MBI公司产品，MTT购自Sigma公司，PCR仪为美国MJ产品，酶联免疫检测仪为BioTek产品。1.2壳聚糖的配制从壳聚糖胶囊中获得壳聚糖，用无血清培养基配成相应浓度。1.3细胞的培养与处理白血病细胞SHI1由苏州大学附属第一人民医院血液研究所提供，K562细胞由本教研室复苏后常规培养（37℃,5%CO2)。细胞生长至对数生长期，分为4组，使壳聚糖浓度分别为0，50，100，200μg/ml。常规培养48h后收集细胞。1.4总RNA的制备与鉴定细胞总RNA的提取采用Trizol一步法［3］。用752紫外分光光度计分别于260nm和280nm处测量D值。以D（260nm)与D(280nm)的比值确定RNA的纯度，以D(260nm)值确定RNA的量并稀释到终浓度为1μg/ml。1μl样品RNA含量=D(260nm)×40μg/ml×稀释倍数1.5RTPCR反应（两步法）检测ppGalNAcT2表达1.5.1反转录cDNA反应体系①六碱基随机引物1μl；ddH2O（DEPC处理）12μl；25℃×10min预热；②细胞株RNA（1μg...