加味四逆散对肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA影响的研究作者：郑旭锐，韦永红，周莉英，孙守才，宇文亚【摘要】目的观察加味四逆散对肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA影响，探讨其抗肝纤维化的药理机制和作用。方法采用二甲基亚硝胺腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型，加味四逆散灌胃给药，采用实时定量PCR技术检测各组大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原mRNA表达的水平。结果加味四逆散能明显降低肝纤维化大鼠肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原的含量，与病理模型组比较有显著性差异（P《0.05）。结论加味四逆散可有效的减少肝组织Ⅰ，Ⅲ型胶原的生成，对肝纤维化有肯定的治疗作用。【关键词】加味四逆散；肝纤维化；Ⅰ型胶原；Ⅲ型胶原TheEffectsof激aWeiSiNiSanonExpressionofCollagenⅠ,ⅢofHepaticFibrosisinRatsAbstract：ObjectiveThemechanismofChineseHerbailcompoundJLAWEISINISANintreatinghepaticfibrosiswerefurtherexploredandstudiedbyobservingtheexpressionofCollagenⅠandⅢCollagenmRNAinliver.MethodsTheratfibrosismodelwasinducedbyDMN.ThegroupsoftreatmentwerefedwithJWSNSgavage.CollagenImRNAandCollagenIIImRNAweredetectedinliversampleswithRTPCR.ResultsUponpathologicalexamination,theJWSIStreatmenthadsignificantlyreversedDMN-inducedliverfibrosis.INJWSIStreatmentgrouptheexpressionofcollagenⅠ，ⅢinliverwasmarkedlyreducedrespectivelyaccordingtoRTPCRanalysisascomparedwithmodelgroup(P《0.05).ConclusionThemechanismoftreatinghepaticfibrosiswithJWSNSappearstobeduetotheenhancementofdegradiationofcollageninliver.JWSNAcantreathepaticfibrosiseffectively.Keywords：JWSNS;Hepaticfibrosis;CouagonⅠ;CouagenⅢ加味四逆散是治疗慢性病毒性肝炎的有效经验方，既往的临床观察和动物实验研究已经证实该方具有良好的防治肝纤维化作用［1～3］。本实验采用二甲基亚硝胺（DMN）腹腔注射诱导肝纤维化大鼠动物模型，应用实时定量PCR技术检测大鼠肝组织中I（CoLI）,Ⅲ型胶原（CoLⅢ）mRAN表达，探讨加味四逆散抗肝纤维化的作用机制。1材料1.1动物SD大鼠46只，雄性，清洁级，体重（180±20）g，由第四军医大学实验动物中心购进。动物合格证号：军医动字第20022020号。1.2药品及试剂加味四逆散煎剂（由柴胡、枳壳、白芍、黄芪、丹参、桃仁）等药组成，由陕西中医学院附院药房购进，经本院药物鉴定教研室鉴定无伪劣品。药物加水浸泡常规煎煮，过滤，水浴蒸发至每毫升含生药3.5g，置于4℃冰箱保存备用。秋水仙碱（云南医药集团云南药业有限公司生产，批号20020208）、TRIzolRegent(Invitrogen公司)、RTPCRKit（大连宝生物工程有限公司）、二甲基亚硝胺（Sigma公司）。2方法2.1动物模型制备大鼠在适应性饲养1周后随机选取8只作为空白对照组（A组），其余38只均用DMN（用生理盐水稀释至5mg/ml）以10ml/kg体重腹腔注射，1次/d，每周连续3d，连续4周。2.2分组4周造模结束后，38只大鼠共死亡8只，死亡率为21.1%，将剩余30只造模大鼠随机分为：B组（病理模型组）10只；C组（秋水仙碱组）10只；D组（中药治疗组）10只。2.3给药A，B组以生理盐水4ml/只灌胃；C组以秋水仙碱0.01mg/kg体重灌胃；D组以加味四逆散煎剂10ml/kg体重灌胃。以上各组用药均1次/d，连续用药30d后结束。2.4标本制作实验结束后取部分新鲜肝组织用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚5μm。2.5普通病理组织学观察参照中华医学会传染病寄生虫病分会（2000西安）制定的《病毒性肝炎防治方案》，病理组织学分级标准为：正常肝脏或无明显胶原纤维增生为“-”级；胶原纤维增生，中央静脉和汇管区有少量纤维索放散延伸，但无间隔形成为“+”级；胶原纤维增生，中央静脉和汇管区结缔组织变厚，由此向四周伸出纤维索，形成不完全间隔为“++”级；胶原纤维大量增生，有个别菲薄的完全间隔形成（假小叶），完全间隔较厚，假小叶大量形成为“+++”级。2.6RNA抽提和RT反应实验结束后取部分新鲜肝组织，按照Trizol试剂说明提取总RNA，加入20μlDEPCtreated水溶解，用紫外分光光度260/280进行样品的浓度测定和质量鉴...