荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA与血清标志物关系的研究【摘要】;;目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBV-DNA定量之间的关系，为临床诊断和治疗提供有价值的判断标准。方法：483例血清标本采用ELISA方法对其免疫学标志物进行检测，并用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测血清H作者：彭端亮,魏运顺作者单位：1.四川省医学科学院附属医院,四川简阳641400;2.简阳市计划生育和人口服务站,四川简阳641400【摘要】目的：探讨乙型肝炎病毒(HBV)血清学检测出现的组合模式与HBV-DNA定量之间的关系，为临床诊断和治疗提供有价值的判断标准。方法：483例血清标本采用ELISA方法对其免疫学标志物进行检测，并用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测血清HBV-DNA。结果：经FQ-PCR检测，142例HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+)的标本，其HBV-DNA检出率97.89％(139例)，平均HBV-DNA拷贝数为6.92E7copies/ml；205例HBsAg(+),HBeAb(+),HBcAb(+)的标本，其HBV-DNA检出率49.27％(101例)，平均HBV-DNA拷贝数为4.35E6copies/ml；48例HBsAg(+),HBcAb(+)的标本其HBV-DNA检出率47.91％(23例)，平均HBV-DNA拷贝数为7.05E6copies/ml。结论：荧光定量PCR检测血清HBV-DNA准确灵敏，可以检测HBV的真实感染和复制状态，结合乙肝病毒的血清标志物检测，对于乙肝临床诊断，治疗方案的选择，疗效观察及预后判断有极其重要的作用。【关键词】乙型肝炎病毒；乙肝标志物；ELISA；荧光定量PCRStudyontheRelationBetweenHepatitisBvirusDNADetectedbyFluorescenceQuantitativePCRandHepatitisBVirusMarkersPENGDuan-liang,WEIYun-shun(TheAffiliatedHospitalofSichuanMedicalSciencesAcademy,激anyang,Sichuan641400,China)Abstract:ObjectiveToexploretherelationshipbetweenthedifferentpatternsofHBVmarkersandHBV-DNAquantityforthediagnosisandtreatmentofhepatitisB.MethodsHBVMandHBV-DNAwastestedinserumsamplesbyELISA乙型肝炎是一种严重威胁人类健康的传染病，据世界卫生组织估计，每年有100万人死于本病，我国为乙肝高发区，约有12亿人为乙肝病毒携带者[1]。乙肝病毒血清标志物即两对半的检测是常用方法之一，其方便快捷，成本低廉，但ELISA法(酶联免疫吸附实验)只能提供阴阳性的判断，不能提供乙肝病毒的的具体含量。随着分子生物学的发展[2]，荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术广泛用于临床的诊断和治疗，它是直接检测血清中的乙肝病毒DNA，HBV-DNA是反映人体内乙肝病毒复制的直接指标，也是最特异，最灵敏的指标，不同的病毒数量反映了乙肝病毒在患者肝脏中的复制情况。笔者通过检测乙肝患者血清病毒标志物和其中病毒的含量，将二者结果进行总结分析，了解他们之间的关系，并找出一定规律，以研究该方法的实用性及临床应用价值。1材料与方法1.1材料乙肝患者血清标本于我院2007年12月至2008年5月的门诊和住院病人，共计483份，男305人，女178人，平均年龄45岁，临床诊断均符合2000年全国传染病与寄生虫病学术会议诊断标准[3]。1.2仪器与试剂血清标志物仪器为WellscanMK3酶标仪测定，试剂由北京万泰公司提供；HBV-DNA检测仪器为罗氏公司Lightcycler2.0荧光定量扩增仪。1.3方法乙肝血清标志物采用酶联免疫吸附实验(ELISA法)，严格按操作说明检测，结果由MK3酶标仪测定，每一批标本均设阴阳性和临界对照。荧光定量PCR测定HBV-DNA严格按试剂盒说明书和仪器厂家提供的方法进行。每次试验设立4个HBV-DNA标准品系列浓度，分别为5×104，5×105；5×106；5×107，其检测灵敏度为1×103copies/ml，严格按照Kword[4]等提出的防污染措施进行实验操作。1.4统计学处理定量结果采用求算术平均值的方法计算HBV-DNA平均拷贝数；组间样本率比较采用u检验，计数资料采用t检验，最后用SPSS软件统计处理。2结果血清标志物经ELISA检测可分为以下几种组合模式：结果显示：标志乙肝感染期的血清HBsAg,HBeAg,HBcAb均阳性的标本(俗称大三阳)，142例中FQ-PCR检测HBV-DNA几乎全为阳性(阳性率为97.89％),标志长期HBV携带者的血清HBsAg,HBeAb,HBcAb(俗称小三阳)的205例标本中FQ-PCR检测HBV-DNA有101例为阳性(阳性...