褪黑素保护大鼠慢性肝损伤的动态观察赵宗豪梅俏吴军胡咏梅徐新华许建明摘要目的观察褪黑素抗大鼠慢性肝损伤作用。方法用四氯化碳(CC1.)制造大鼠慢性肝损伤模型，同时予褪黑素腹腔注射;在造模的第1、2、3月末处死大鼠，分别测定大鼠体重、肝脏湿重和血淸丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)及白蛋白和总蛋白水平，并作肝脏病理学检查。结果褪黑索可以显著降低CO,诱导大鼠慢性肝损伤早期的ALT、AST,在大鼠慢性肝损伤的中期・MT可提高血清白蛋白水平和白球比值•改善肝脏病理损伤。结论褪黑素在CCh诱导的大鼠慢性肝损伤早期可以减轻肝脏炎症，而在中晚期，MT主要起着抑制肝纤维化的作用。主题词褪黑激素/药理学；肝硬化中图分类号R575.2；R977.1文献标识码A文章编号1000-1492(2003)04-0255-03近年来，研究发现松果腺分泌的褪黑素(Me-latonin,MT)有强大的抗氧化能力，可以防治四氯化碳(CC14)等所致的氧化性损伤，我们已报道过不同剂量的MT可以显著减轻CC1,诱导的小鼠肝损伤⑴。目前已有MT改善大鼠慢性肝损伤的量效关系的研究报道⑵3】，但MT在不同时间段对CC14诱导的慢性肝损伤的具体情况尚不明了。本研究拟在建立CCh大鼠肝纤维化的基础上，动态观察MT对大鼠慢性肝损伤的保护作用，对MT保护大鼠慢性肝损伤的时效关系作一初步探讨。1材料与方法1.1主要试剂CC1,(Tetrachloride,CCh)分析纯，由合肥医药站提供；褪黑素购自Sigma公司，临用前以无水乙酹溶解，再加生理盐水稀释，使乙醇终浓度小于0.2%(v/v),过滤消毒后使用；丙氨酸转氨酶(alaninetransaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(asparagicacidtransaminase,AST)、总蛋白、门2003-04-08收稿,2003-05-28修回基金项目：安徽省自然科学基金(编号：01043904)和国家教育部科学技术研究重大项目(编号：102068)作者单位：安徽医科大学第一附属医院消化科，合肥230022作者简介：赵宗豪•男.28岁，硕士研究生；许建明•男・49岁•教授•博士生导师•安徽省消化学会主任委员蛋白(albumin.ALB)测定试剂盒均购于上海荣盛生物技术有限公司。1.2动物及分纽取体重131〜181g$SD大鼠78只(由安徽医科大学动物实验中心提供)，标准饲料，自由饮水。随机分为3组：正常纽(18只)、MT组(30只)、模型组(30只)。采用CCh制备慢性肝损伤模型，即将CC14与精制花生油按2:3比例配成40%CC1,油剂溶液，按3ml/kg剂量皮下注射,每3日1次，连续3个月。正常对照组皮下注射等量花生油。MT组在造模开始时，给予MT每门10mg/kg体重腹腔注射直至动物被处死，正常对照和模型组给予等容积生理盐水。1.3观察指标及方法1.3.1一般指标各组动物每月测1次体重；在造模的第1、2、3月末分批处死大鼠(每批各组6只),取血并分离血淸，一2()C保存；同时分离肝脏称取肝脏湿重并取少量肝组织作病理检查。1.3.2生化指标AI.T、八ST、总蛋白和白蛋白测定按试剂盒说明书进行。1.3.3肝脏病理学检查取大鼠肝脏用10%甲醛固定，常规脱水、石蜡包埋、切片，HE染色，光镜下观察肝脏炎症和纤维化程度。按下述标准进行肝脏炎症指数(theindexofhepaticinflammation♦IHI)评分:将肝细胞坏死、气球样变、炎细胞浸润划为0〜3级，三者之和计为1HI总分，以正常肝脏为0级;肝纤维化指数(theindexofliverfibrosis,ILF)分为3级：无成纤维细胞增生，记0分；仅汇管区有少量成纤维细胞增生，记1分；汇管区成纤维细胞增生并向小叶内延伸，呈较窄较短纤维条索，记2分；汇管区成纤维细胞大量增生并向小叶内大量延伸，纤维隔形成伴有小叶结构紊乱，记3分。1.4统计学处理数据用表示，以r检验作统计分析。2结果2.1MT对一般指标影响的动态观察模型组人鼠在第1月末肝脏明显肿大，个别大鼠肝表面出现结节■在第2、3月末模型组大鼠肝脏表面结节形成率显著增加，明显高于MT组，且大都伴有门静脉扭曲扩张，少数大鼠还出现了腹水。在第1、2、3月末模型组大鼠体重平均增长体重与正常组相比差异有显著性（PV0.01）；第1月末MT组大鼠体重平均增长（50.5±11.0）g,与模型组（17.2±15.5）g比较差异有显著性（P<0.01）,但第2、3月末两组差异无显著性，且两组肝脏湿重与体重比值在第1、2、3月末差异均无显著性。2.2MT影响生化指标的动态观察第1...