食品安全国家标准食品营养强化剂乳铁蛋白1范围本标准适用于以乳及乳制品为原料，经分离、杀菌、提取、精制、干燥制得的食品营养强化剂乳铁蛋白。2技术要求2.1感官要求感官要求应符合表1的规定。表1感官要求项目要求检验方法色泽粉红色至红褐色取适量试样置于清洁、干燥的无色玻璃烧杯中，在自然光线下，观察其色泽和状态。状态粉末2.2理化指标理化指标应符合表2的规定。表2理化指标2.3微生物指标微生物指标应符合表3的规定。表3微生物指标项目指标检验方法总蛋白，w/%≥93.0GB5009.5乳铁蛋白占总蛋白质量百分比，w/%≥90.0附录A中A.2干燥减量，w/%≤4.5GB5009.3直接干燥法a灰分，w/%≤1.5GB5009.4铁含量，mg/100g≤35GB/T5009.90溶解度通过试验附录A中A.3pH5.2~7.2GB/T9724b铅（Pb）/（mg/kg）≤1GB5009.75砷（以As计）/（mg/kg）≤1GB5009.76a干燥温度和时间分别为（105±2）℃和5h。b20℃下测定2%水溶液。附录A项目指标检验方法菌落总数/（CFU/g）≤1000GB4789.2霉菌和酵母菌/（CFU/g）≤10GB4789.15大肠菌群/（MPN/g）＜3.0GB4789.3MPN计数法沙门氏菌未检出/25gGB4789.4金黄色葡萄球菌未检出/25gGB4789.10定性检验检验方法A.1一般规定本标准除另有规定外，所用试剂的纯度均为分析纯，所用标准滴定溶液、杂质测定用标准溶液、制剂及制品，应按GB/T601、GB/T602、GB/T603的规定制备，实验用水应符合GB/T6682-2008中三级水的规定。试验中所用溶液在未注明用何种溶剂配制时，均指水溶液。A.2乳铁蛋白占总蛋白质量百分比的测定A.2.1方法提要采用高效液相色谱法，在选定的工作条件下，于紫外检测器280nm处通过色谱柱分离测定乳铁蛋白，面积归一化法定量。A.2.2试剂和材料A.2.2.1超纯水。A.2.2.2乙腈（95%）：色谱纯。A.2.2.3氯化钠溶液：0.9%。A.2.2.41%三氟乙酸溶液：吸取1mL三氟乙酸，加超纯水定容至100mL，过0.45μm滤膜。A.2.2.5乳铁蛋白标准品。A.2.2.60.45μm微孔水相滤膜。A.2.3仪器和设备A.2.3.1高效液相色谱仪：配备紫外检测器。A.2.4参考色谱条件A.2.4.1色谱柱：AlltechprosphereC4300A（150mm×4.6mm），AlltechAll-guardTMGuard（7.5mm×4.6mm或具有同等性能的色谱柱。A.2.4.2检测波长：280nm。A.2.4.3流速：1.0mL/min。A.2.4.4样品温度：10℃A.2.4.5柱温：35℃A.2.4.6进样量：50μLA.2.4.7流动相梯度洗脱参数见表A.1。表A.1流动相梯度洗脱程序表时间（min）超纯水/%乙腈/%三氟乙酸溶液/%0.0073.316.71010.0035551011.0018721013.0018721015.0073.316.710A.2.5分析步骤称取试样和乳铁蛋白标准品各0.1g，分别加入超纯水（或氯化钠溶液）10mL使其溶解后，通过0.45μm滤膜，得到试样溶液和标准溶液。量取试样溶液50μL注入高效液相色谱仪，在280nm处进行测定，使试样液主峰和保留时间和标准溶液主峰的保留时间相一致（约为10min）。主峰作为乳铁蛋白峰，在主峰保留时间2倍范围内测定所有溶出的峰面积，主峰面积与所有峰面积的比值即为总蛋白中乳铁蛋白的含量。A.2.6结果计算乳铁蛋白占总蛋白的质量分数w1按式（A.1）计算：……………………………（A.1）式中：Ai——主峰的峰面积；A——所有溶出的峰面积。实验结果以平行测定结果的算术平均值为准，保留三位有效数字。A.3溶解度试验A.3.1分析步骤称取0.8g试样，加入约40mL的20℃水中，充分搅拌2min以上，静止后观察。此时试样应完全溶解，溶液澄清透明无肉眼可见杂质。