第26卷第4期吉林化工学院学报Vol.26No.42009年8月JOURNALOFJILININSTITUTEOFCHEMICALTECHNOLOGYAug.2009收稿日期:2009-07-16作者简介:董少鹏(1970-,男,吉林长春人,吉林省石油化工设计研究院高级工程师,主要从事石油化工方面的研究.3通讯作者:娄大伟(1973-,副教授,E-mail:lou@jlict.edu.cn文章编号:100722853(20090420005203二醇柱高效液相色谱法测定人参提取液中的人参皂苷董少鹏1,娄大伟23,孙大志2,王悦虹2,任红2(1.吉林省石油化工设计研究院工艺所,吉林长春130021;2.吉林化工学院化学与制药工程学院,吉林吉林132022摘要:采用二醇柱,在等度洗脱条件下,建立了高效液相色谱(HPLC定量分析人参提取液中人参皂苷的检测方法.优化的色谱条件:LiChrospher100Diol柱(250mmx2mmi.d.,5μm,流动相为乙腈2水(体积比为82∶18,流速为1.0L・min-1,检测波长为200nm,柱温为15.℃研究结果表明:在较低温度下,采用二醇柱分析7种主要人参皂苷,具有分析速度快,不需要梯度洗脱程序,方法简单等优点.关键词:高效液相色谱柱;二醇柱;等度洗脱;人参皂苷中图分类号:R286.0文献标识码:A人参是我国名贵的药材,已有数千年的药用历史.目前,国内外对其主要的活性成分人参皂苷预防和抑制肿瘤的作用进行了深入研究.研究结果发现:人参总皂苷及各单体化合物对促进肿瘤细胞凋亡,促使肿瘤细胞分化,提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,以及提高机体抗肿瘤的免疫力等方面有重要的作用.按照人参皂苷的结构类型、糖基的数量和位置将分离鉴定出的数十余种单体皂苷化合物分为3组:(a20(S一原人参二醇型,如人参皂苷Ra,Rb1,Rb2,Rb3,Rc,Rd,Rg3,Rh2,Rs;(b20(S一原人参三醇型,如人参皂苷Re,Rf,Rg1,Rg2,Rh1;(c齐墩果酸型,如人参皂苷Ro.在所有这些人参皂苷中,7种主要成分(Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2,和Rb1是含量最高的,也是主要的药理活性成分.一些分离方法包括:薄层色谱(TLC[1]、气相色谱(GC[2]和配有紫外检测器(UV、蒸发光散射检测器的高效液相色谱或质谱检测[3-6]都已经被研究.在这些方法中,高效液相色谱已经广泛应用于人参皂苷的分析.由于它的灵敏度高,广泛应用于不挥发性化合物,而且其不需要有衍生化就能完成分析.高效液相色谱也更容易应用于上述的各种检测技术.在高效液相色谱法中,研究普遍采用了传统的C18柱,使用梯度洗脱,流动相采用乙腈与水的混合物或缓冲液.这些方法使人参皂苷成分分离受到限制,而且分离时间很长,大部分分离时间需要60min左右.本文建立了一种新的人参皂苷分离方法,采用了固相萃取前处理技术对样品进行处理后,使用二醇柱进行等度洗脱分离.与传统的C18分离方法相比,该法具有分离速度快,分离度好,灵敏度高等优点,而且实现了样品中7种主要人参皂苷的同时测定.1实验部分1.1试剂与仪器人参皂苷标准对照品Rf,Rg1,Rd,Re,Rc,Rb2和Rb1购于法国Extrasynthese公司,置于4℃冰箱中避光保存;用于液相色谱流动相或样品处理的乙腈和甲醇(色谱纯,购于天津市大茂化学试剂厂;所有实验用水均采用高纯水;人参样品购于kanebo公司.岛津LC—20AT高效液相色谱仪(紫外2可见检测器;色谱柱:LiChrospher100Diol柱(250mm×2mmi.d.,5μm;色谱工作站:浙大智达N2000系统(浙江大学智达信息工程有限公司;固相萃取小柱:C18(500mg/3mL,北京华尔博科技有限公司.1.2标准溶液的配制使用甲醇为溶剂配制成浓度为300ng/μL的标准储备液.取适量的标准储备液逐级稀释后得到所需浓度的标准溶液.用于高效液相色谱定性分析时,配制成适宜浓度的单品溶液.所有样品均置于冰箱内保存.1.3样品处理方法准确量取人参提取液1mL于5mL样品瓶中,加入1mL水,超声处理10min.取1mL处理液过C18固相萃取小柱(预先用5mL甲醇和5mL水活化.分别用5mL水和5mL30%的甲醇水溶液洗柱后,用3mL甲醇洗脱待分析物,洗脱液经0.2μmPTFE滤膜过滤后,在室温条件下用氮气吹干.残留物用适宜量甲醇定容后,用于高效液相色谱测定.1.4色谱条件流动相:乙腈2水(体积比为82∶18,流速:1.0L/min;检测波长:200nm;柱温:15;℃柱温控制:将色谱柱置于含有常温水的保温水槽中,在不断搅拌条件下,向水槽中不断加入碎冰,待温度达到实验温度,停止加冰.温度稳定5min后,进行液相色谱测定[7].2结果与讨论2.1色谱分离条件的优化由参考文献...