青蒿琥酯配伍螺旋藻多糖抗肝癌SMMC-7721细胞活性作用探究【摘要】目的：研究青蒿璩S旨(artesunate,ART)配伍螺旋藻多糖(polysacchridefromspriulina,PSP)对肝癌SMMC-7721细胞株的抑制作用。方法：MTT法分别测定ART、PSP、ART与PSP配伍对肝癌SMMC-7721细胞的抑制作用，ELISA方法研究凋亡蛋白Caspase-3的活性。结果：ART在体外可明显抑制SMMC-7721细胞的增殖，在24h、48h、72h的IC50值分别为45.2Pg/ml、34.7ug/ml、22.1ug/ml；PSP对肿瘤SMMC-7721的抑制作用稍弱，在24h、48h,72h的IC50分别为157.4g/ml、140.3g/ml、110.0ug/ml；当ART(12.5ug/ml,25.0ug/ml>50.0ug/ml)与PSP(90ug/ml)配伍使用时，显示出较强的抗瘤作用；ART与PSP配伍作用细胞后，ELISA方法检测到酶Caspase-3的活性增强。结论：ART与PSP配伍使用时对肝癌S丽C-7721细胞的增殖有明显的抑制作用，其作用途径可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡。【关键词】青蒿琥酯；螺旋藻多糖；抗肿瘤分类号R735.7文献标识码B文章编号1674-6805(2013)34-0142-02青蒿境酿是青蒿素（artemisinin）的一种重要衍生物，近年来就其在抗肿瘤方面的研究是一热点［1-4］。在前期对青蒿琥酯和螺旋藻多糖单体分别研究的基础上，观察青蒿琥酯配伍螺旋藻多糖对肝癌细胞的抑制作用，现将结果报道如下。1材料1.1药品与试剂青蒿琥酯购于桂林制药厂，螺旋藻多糖购于广西北海绿A螺旋藻公司（进一步纯化由广西医科大学基础医学院实验中心贾晓栋讲师完成，纯度迗92.05%）,S丽C-7721细胞株购于中科院上海细胞库，RPMI-1640培养液（美国Gibco公司），小牛血清（杭州四季青生物公司），四唑盐（MTT）购自Sigma公司，Caspase-3检测试剂盒购于碧云天生物技术研究所。1.2实验仪器全自动C02孵箱（ThermoFormo），倒置显微镜（日产），酶联免疫检测仪（Bio-Rad公司）。2方法2.1细胞培养SMMC-7721置于含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液，37°C、5%C02条件下培养，待细胞长至约80%密度时，用0.25%胰蛋白酶消化传代，取对数生长期细胞用于实验。2.2ART对肿瘤细胞的抑制率取对数生长期的SMMC-7721细胞，按每孔细胞（3〜5）X103个，190Pl接种于96孔培养板中，每组设6个复孔，待细胞贴壁后加入各组药物，ART终浓度梯度为25yg/ml、50ug/ml、100ug/ml，37°C、5%C02饱和湿度下培养24h、48h、72h，0D值测量波长为双波长570/630nm,以下列公式计算抑制率：抑制率=（1-加药组0D/对照组OD）X100%。2.3PSP对肿瘤细胞的抑制率方法同2.2，PSP终浓度分别为45Pg/ml、90ug/ml、180yg/ml作用肿瘤细胞24h、48h、72h后计算抑制率。2.4ART与PSP配伍使用对肿瘤细胞的抑制率方法同2.2，将ART终浓度分别为12.5Pg/ml、25.0Pg/ml、50.0yg/ml与PSP浓度为90ug/ml配伍作用肿瘤细胞48h、72h后计算抑制率。2.5Caspase-3活性的研究ART与PSP配伍作用SMMC-7721细胞48h后收集细胞，每2X106个细胞的比例加100ul裂解液、冰浴、离心，收集上清，测试各样品孔中0D值，根据标准曲线方程求得相应样品孔中Caspase-3活性。3结果3.1ART对SMMC-7721细胞的抑制率和IC50值ART不同浓度对细胞的抑制率得出后，用Bliss法计算出ART作用24h、48h、72h的IC50分别为45.2ug/ml、34.7ug/ml、22.1pg/ml。见表1。3.2PSP对SMMC-7721细胞的抑制率和IC50值PSP不同浓度对细胞的抑制率得出后，用Bliss法计算出PSP作用24h、48h、72h的IC50分别为157.4ug/ml、140.3yg/ml、110.0yg/mlo见表2。3.3ART与PSP联合使用ART与PSP配伍作用肿瘤细胞48h、72h后，12.5ug/ml、25.0ug/ml的ART与90.0ug/ml的PSP对肿瘤SSMC-7721细胞的抑制率最高可达75.0%,配伍使用显示出很好的抗瘤效应。见表3。3.4Caspase-3活性变化ART与PSP联合作用于SMMC-7721细胞48h后，根据0D值由拟合的标准曲线求得相应样品空中Caspase_3的浓度(48h)。与空白组比较，配伍作用细胞48h，细胞中Caspase-3浓度高于对照组。见表4。4讨论ART是从中药青蒿中提取的活性成分，螺旋藻多糖是一种从我国海南、广西等省区盛产的螺旋藻中提取的水溶性多糖化合物，课题组成员前期已对其抗瘤作用开展了一定研究［1，5］。在前期基础上，尝试ART与PSP配伍使用对肝癌S醐C-7721细胞的抗瘤作用。结果显示，ART对肝癌S...