猪脾转移因子的制备及临床应用乔宏兴,白静(郑州牧业工程高等专科学校,河南郑州450011摘要:本试验采用透析法提取猪脾转移因子(TF,并对其理化性质、生物活性、安全性进行了研究。结果表明,TF可增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,体外抑菌结果显示金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌对转移因子敏感,而链球菌不敏感。对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎分别使用TF(0.2、0.1、0.05mL/kg和药物进行治疗,结果表明使用0.1mL/kgTF的剂量效果较好。关键词:转移因子;巨噬细胞;抑菌中图分类号:S852.4文献标识码:A文章编号:1671-7236(201107-0203-03转移因子(transferfactor,TF是从致敏淋巴细胞中提取的一种可溶性不耐热的小分子肽,分子质量为3500~5000,56℃30min可灭活,低温保存数年活性不消失。具有传递特异性细胞免疫的作用,还能非特异地增强一般细胞免疫作用(冯来坤等,1999。转移因子的作用发生迅速,维持时间也较长,可达数月至一年以上。由于转移因子是小分子成分,无抗原性,长期应用机体也不产生抗体。近年来研究证明,转移因子作用无种属特异性(蔡琳昌,1990,生化指标、生物活性及临床效果均与人转移因子相似,且无毒,不引起过敏反应。因此,可利用猪脾制备,河南是养猪大省,每年屠宰数量巨大,所产生的猪的废弃物脾脏数量也很大,可以将猪的脾脏变废为宝,提取生物制品。作者对猪脾转移因子的制备、活性检测、免疫特性及在临床上的应用等进行了研究,以供于兽医临床使用提供依据。收稿日期:2010-12-09作者简介:乔宏兴(1976-,男,河南人,讲师,硕士,研究方向:动物免疫学、预防兽医学。基金项目:河南省教育厅项目(2009A230006。1材料与方法1.1材料猪脾脏,由郑州肉联厂提供;试剂:双蒸水、1%鸡红细胞、可溶性淀粉由郑州牧业工程高等专科学校微生物教研室提供;仪器:高速组织捣碎机、低温冰柜、离心机、透析袋、紫外分光光度计等;试验动物:小白鼠,购于郑州大学实验动物中心。猪,购于河南某猪场。1.2方法1.2.1透析法制备将冻存的猪脾脏取出融化,去脂肪、被膜,充分洗净。用组织捣碎机绞碎,加适量生理盐水后,用高速组织捣碎机高速(12000r/min匀浆2次,每次1min。将匀浆置-20℃反复冻融3次。最后一次融化后以3000r/min离心30min,取上清,将上清置透析袋内,用无热原的冷生理盐水在0~4℃环境下透析过夜,收集袋外透析液即为制备的转移因子(张萍等,2007。-20℃保存备用。1.2.2猪脾转移因子理化性质检验按分光光度法测定,在(251±1nm处有最大吸收度,紫外光光度计测定260nm与280nm比值;取2mL加入适量茚三酮溶液,加热后进行反应。1.2.3安全试验取小白鼠40只,分成1、2、3、4组,(1.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine,QingdaoAgriculturalUniversity,Qingdao266109,China;2.CollegeofHaidu,QingdaoAgriculturalUniversity,Laiyang265200,China;3.VeterinaryStationinGuandaoTown,Qixia265316,ChinaAbstract:ThesusceptibilitytestofFlorfenicolandOxytetracyclineHydrochlorideonsixstrainsofEscherichiacoliandSalmonellawascarriedoutbythebrothdilutioncheckerboardmethodinordertostudythecombinedantibacterialeffectinclinicalapplicationinvitro.TheresultssuggestedthattheMICofsingledrugonthestandardstrainsofEscherichiacoliandSalmonellawas1to8μg/mL,ontheclinicalstrainswas64to128μg/mL.TheFICofdrugcombinationwas0.5,0.75,1.5,0.5,0.75,1.0;therewerefourstrainsappearedadditiveeffectwhiletheothertwostrainsappearedsynergisticandirrelevanteffect.Keywords:Florfenicol;OxytetracyclineHydrochloride;drugcombination每组10只,第4组为对照组,第1、2、3组分别经尾静脉注射0.1、0.15、0.2mL,对照组注射生理盐水0.2mL,连续7d观察小白鼠反应,48h内不得有死亡。1.2.4无菌检验取本品分别接种到普通琼脂培养基、厌氧培养基及马铃薯葡萄糖琼脂培养基上,37℃培养1周,观察有无需氧菌、厌氧菌、霉菌生长。1.2.5小白鼠巨噬细胞吞噬功能试验取成年雄性小白鼠40只,随机分成4组,第1组为低剂量转移因子组(每只小白鼠腹腔注射自制转移因子0.5mL,第2组为中等剂量转移因子组(1mL/只,第3组为高剂量转移因子组(2m...