纤维素酶产生菌的筛选_鉴定和产酶条件优化第50卷第5期第年5期20113月湖北农业科学Vol．50No.5Mar．，2011HubeiAgriculturalSciences纤维素酶产生菌的筛选、鉴定和产酶条件优化阮周波，王忆丽，何未男，郑江燕，张霞，陈琼，胡松英，张应烙321004）（浙江师范大学化学与生命科学学院，浙江金华摘要：采用稀释平板法分离马铃薯瓢虫肠道菌，利用刚果红平板法对产纤维素酶菌株进行初筛，选取透明圈较大的菌株进行摇瓶发酵复筛，根据菌株形态、生理生化特征对菌株进行初步鉴定，通过正交法优化产酶条件。结果表明经初筛和复筛得到1株酶活相对较高的菌株B－12，经初步鉴定为芽孢杆菌属（Bacillussp．）。1．25％麦芽浸粉为碳源、1．5％KNO3为氮源、0．2％的NaCl、0．1％的CMC－Na、接种量6％、培养时间44h为B-12产酶的适宜条件。优化后发酵液中的内切葡聚糖酶活（CMCA）为111．710U／mL，较培养44h后的酶活提高了8.78％；滤纸酶活（FPA）为35．017U／mL，提高了387．23％；β－葡萄糖苷酶酶活（BGL）为116．799U／mL，提高了700．38％。关键词：马铃薯瓢虫；肠道菌；纤维素酶；优化：Q935文献标识码：A：0439－8114（2011）05－0915-06Screening，IdentificationandCulturalConditionOptimizationofCellulase-producingStrainsfromtheIntestineofHenosepilachnavigintioctomaculataRUANZhou－bo，WANGYi－li，HEWei－nan，ZHENG激ang－yan，ZHANGXia，CHENQiong，HUSong－ying，ZHANGYing－lao（CollegeofChemistryandLifeSciences，Zhe激angNormalUniversity，激nhua321004，Zhe激ang，China）Abstract：ThebacteriafromtheintestineofHenosepilachnavigintioctomaculatawereisolatedthroughthepourplatemethod．TheywerepreliminarilyscreenedusingCongoredmediumplatemethod，andthenscreenedaccordingtotheircellulaseactiv-itiesbyflaskshakingfermentationmethod．Thestrainwasidentifiedbasedonmorphologicalandphysiologicalcharacters．Inaddition，theculturesubstratesandfermentationconditionswereoptimizedbyorthogonalexperimentmethod．Ahighcellu-lase－producingstrainB－12wasscreenedfromtheintestineofH．vigintioctomaculataanditwasidentifiedasBacillussp．．Thebestcultureconditionswereasfollows：substratewere1．25％maltmeal，1．5％KNO3，0．2％NaCl，and0．1％CMC－Na，inoculationquantitywas6％，culturetimewas44h．Inthiscondition，theenzymeactivityofCMCase，filterpaperenzyme（FPA），andβ－glucosidase（BGL）were111．710，35．017，and116．799U／mLrespectively，whichwere8.78％，387.23％and700．38％higherthanthoseoftheinitialstrainrespectively．Keywords：Henosepilachnavigintioctomaculata；intestinalbacteria；cellulase；optimization地球上的生物资源主要来自光合生物，其中纤维素［2］。目前，人们对纤维素的降解和利用主要通过纤维素酶的分解来实现。纤维素酶在再生能源利用方面具有广阔的应用前景，可应用于农业、酿造工业、发酵工业、食品工业以及其他领域［3－9］。因此研究纤维素酶有着十分重要的意义。昆虫肠道菌是指能定植于昆虫肠道的微生物，包括土著的昆虫肠道菌和能定植于昆虫肠道环境90％以上为木质纤维素类物质，它们代表了生态系统中营养金字塔最庞大的基层［1］。天然的木质纤维素材料含有纤维素、半纤维素和木质素等。其中纤维素是地球上最丰富的多糖物质，这类物质是植物细胞壁的主要成分也是地球上最廉价的可再生资源。另外，人类活动产生的废弃物中也含有大量的收稿日期：2010－09－17基金项目：国家自然科学基金青年基金项目（21002092）；浙江省自然科学基金项目（Y2100757）；2009年浙江省大学生科技创新活动计划（新苗人才计划2009R404013）作者简介：阮周波（1988－），女，浙江宁波人，在读本科生，研究方向为应用微生物学，（电话）15888985032（电子信箱）907125257＠qq．com；通讯作者，张应烙，讲师，博士，研究方向为应用微生物学与天然药物化学，（电话）0579－82286419（电子信箱）yingla...