三氯乙烯降解菌的分离鉴定及其降解特性王新新张颖严,韩斯琴1,王元芬订,李慧］1.中国科学院沈阳应用生态研究所陆地生态过程贡点实验室，辽宁沈阳H00I6；2.中国科学院研究生院，J惊100049摘要：三氯乙烯是一种具有"三致"效应的有机氯代绘化合物,作为一种重要的化工原料在工业上广泛应用，同时也造成了大量的三氯乙烯进入自然环境，引起了严重的环境污染。为获得更为丰富的三氯乙烯降解微生物资源，利用水坏圭油双相系统从实验室高浓度三氯乙烯胁迫底泥中，分离筛选得到两株三氯乙烯降解菌WF1、FTI0o在三氯乙烯初始质量浓度为5mg-L-'的条件下，培养72h,菌WFI、FTI0对三氯乙烯的降解率分别为53.36%、48.06%；在500吨2乙酸¥内作为共代谢基质的情况下，降解率分别为55.95%、55.62%，降解速率明显提高。根据形态学观察、16项生理生化实验和16S「RNA序列分析结果,将菌株WT1归为Achromobaclerxylosoxidans,将菌株FT10归为Sporosarcinaaquimarinao对菌株培养条件进行优化，经SlidcWEc统计软件拟合，菌株WTI和FT10在牛肉膏蛋白腋液体培养基上的最适生长温度分别为33.7°C和35.4°C,最适生长pH分别为7.爾7.9。关键词：三氯乙烯；降解菌；分离鉴定；底泥；无色杆菌；八叠球菌中图分类号：X172文献标识码:A文章编号：1672-2175(2008)05-1778-06两株三氯乙烯降解,通过菌种鉴定确定其分类地台、LDZX-40型自动高温灭锅、HZQ-C型气浴恒三氯乙烯是一种易挥发的有机氯代姪化合物,作为一种优良的溶剂广泛应用于多个行业。由于不合理的废水排放和意外泄露，它被大量释放到环境中，成为底泥水体中常见的污染物之一⑴。因其分布广泛且具有致畸、致癌、致突变等潜在危险必引，许多国家都已将其列入优先控制污染物黑名单刖，因此探索高效便捷的处理方式具有重要意义。利用微生物降解三氯乙烯的方法具有去除率高、成本低等优点，因而在三氯乙烯污染治理中备受关注曲。目前国际上已经分离到了可以降解三氯乙烯的多种微生物，主要有PseudomonasxMethylocystis^XanthobcicterxMethylosinus、DesulfurotnonasxAlcaligenesxRalstoniaxBurkholderiaxMycobacteriumsJanibactei\Nitrosomonas等"”)l/然而国内三氯乙烯污染治理相关的研究甚少，三氯乙烯降解菌方面的研究更为罕见。本研究从实验室高浓度三氯乙烯污染底泥中，经富集驯化筛选得到位,并探索了降解菌的最适培养条件，以期为修复三氯乙烯污染提供理论依据。1实验材料与方法1.1仪器GNP-9080型恒温培养箱、GLC-3型超净工作温摇床、PTC-100™型PCR仪、GENIE-2型旋涡混合器、5415C型高速离心机、DYY-6B型电泳仪、Bio-Rad凝胶呈像系统、XSP-8CZ型显微镜、752型紫外可见分光光度计、Agilenth6890气相色谱仪。1.2实验材料主要试剂：三氯乙烯、硅油(聚甲基硅醇)、蛋白酶K、TaKaRaAgaroseGelDNAPurification试剂盒、lOxPCRReactionBuffer.10mMdNTPMixture.TaqDNA聚合酶。无机盐培养基：K2HPO41g-L1,KH2PO41g-L1JMaCl0.5g-L1MH4CI1g-L1MgSO4-7H2O0.2g-L'1,CaCl215mg-L1,FeSO4-7H2O2mg-L1,CuSO4-5H2O0.4mg-L1,KI1mg-L'1zMnSO4H2O4mg-L1,H3BO35mg-L-1,CoC12-6H2O1mg-L1,Na2MoO4-2H2O2mg-L'1,NiCl2-6H2O2mg-L'1,pH7.0±0.2o牛肉膏蛋白月东培养基：牛肉膏5g-L'1,蛋白豚10g-L1,NaCl5g-L'1,pH7.0±0.2。13菌种富集、分离纯化供试底泥采自辽河流域浑河沈阳段。采用250mL培养瓶，分别加入200g底泥样品、50mL灭菌蒸粤水,模拟底泥自然环境。加入三氯乙烯,不断提高浓度至5000mg-L'1z120rmin'1摇床25°C恒温富集培养90do在150mL三角瓶中分别加入80mL无机盐培养基和20mL硅j由⑴】，添加三氯乙烯使其终浓度为500mg-L1,加入2g上述经富集培养的底泥，150rmin1摇床25°C恒温培养。每隔7d取5mL培养液转入另一装有同样液体的150mL三角瓶中。重复转接4次后在含有100mgL-1三氯乙烯的无机盐培养基平板上反复划线分离单菌落。1.4三氯乙烯降解效果的测定采用100mL培养瓶，加入50mL无机盐培养基，添加三氯乙烯储备液使三氯乙烯终浓度为5mg-L*0取5mL菌液,4500rmin1离心10min,130°C,进样量1卜山。为考察株共代谢降解三氯弃上清；无菌水洗涤菌体沉淀。1mL无菌水重悬菌体沉淀,接入培养瓶,密封瓶口，1...