YB1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响作者：杨靖许文林李娟弓晋灵吴晓君陈巧云王法春【摘要】目的：观察Y盒结合蛋白1（YB1）对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响。方法：通过脂质体介导的方法将YB1shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF7细胞，经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株。运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测MCF7细胞中YB1mRNA和YB1蛋白的表达水平，运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化，同时运用RTPCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP2的表达水平，并用明胶酶谱法检测MMP2蛋白的活性。结果：稳定转染YB1shRNA的细胞中YB1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞，且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性也较后两组细胞明显下降。转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异。结论:YB1shRNA可以沉默乳腺癌MCF7细胞中YB1的表达，并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP2的表达及活性。【关键词】Y盒结合蛋白1;MCF7;shRNA;迁移和侵袭能力;MMP2［Abstract］Objective:TostudytheeffectsofYboxbindingprotein1(YB1)ontheinvasivenessandmigrationcapabilityofbreastcancercells.Methods：TherecombinanteukaryoticexpressionplasmidincludingYB1shRNAwasintroducedintoMCF7cellsbylipofectaminemediationandthecelllinewithstableexpressionofYB1wasobtainedbyG418screeningandcolonyculture.TheexpressionlevelsofYB1mRNAandproteinweredeterminedbyRTPCRandWesternblotting.Themobility,invasivenessandmigrationcapabilityofcellswereevaluatedbyusingwoundhealingassayandTranswellchambermodelinvitrowhiletheexpressionlevelsofMMP2mRNAandproteinweredeterminedbyRTPCRandWesternblotting,andtheactivityofMMP2proteinwasdetectedbyGelatinZymography.Results:TheexpressionofYB1inthecellstransfectedwithYB1shRNAwasmuchlessthanthecellstransfectedwithrandomfragmentandthecontrolgroup.Themobility,invasiveness,migrationcapabilityandtheexpressionofMMP2aswellastheactivityofMMP2proteinofthecellstransfectedwithYB1shRNAweremuchlowerthantheothertwogroupswhilethedifferencesbetweentheothertwogroupswerenotsignificant.Conclusion:TheinterferenceofYB1withYB1shRNAinbreastcancerMCF7cellscansuppresstheexpressionofYB1andtheinvasivenessandmigrationcapabilityofcells，anddecreasetheexpressionofMMP2andtheactivityofMMP2protein.［Keywords］Yboxbindingprotein1;MCF7;shRNA;invasiveness---本文于网络，仅供参考，勿照抄，如有侵权请联系删除---andmigrationcapability;MMP2Y盒结合蛋白1（Yboxbindingprotein1，YB1）是Y盒蛋白家族成员之一，广泛分布于原核与真核生物，它参与多种生命活动过程，研究发现YB1与人类恶性肿瘤关系非常密切，在部分类型的肿瘤中表达量偏高，已证实YB1异常表达的肿瘤类型有前列腺癌、乳腺癌、肺癌等［1］，尤其在前列腺癌［2］和乳腺癌［3］中，YB1的表达量随病情恶化而增加，这些证据表明YB1与这些恶性肿瘤的发生、发展呈高度相关性。目前的研究结果表明YB1与肿瘤细胞的增殖和耐药及相关基因的转录调节有关，而关于YB1与肿瘤细胞的迁移和侵袭的关系研究相对较少。本研究运用基因沉默的方法将YB1shRNA质粒转染入乳腺癌MCF7细胞中，观察其对MCF7细胞中YB1的表达以及细胞迁移和侵袭能力的影响，从而为乳腺癌基因靶向治疗提供依据。1材料和方法1.1研究对象人乳腺癌细胞株MCF7，购自南京凯基生物有限公司。培养于RPMI1640完全培养基，其中含10%胎牛血清，2mmol/L谷氨酰胺，置于37℃，5%CO2恒温保湿培养箱内培养。1.2试剂和仪器胎牛血清和小牛血清（杭州四季青公司），RPMI1640培养液、G418、脂质体LIPOFECTAMINETM2000，TRIzolReagent（Invitrogen公司），MMLV逆转录酶，TaqDNA聚合酶及其缓冲体系，dNTP，R...