保健品中叶酸含量检测探究【摘要】目的本文新建立了一种高效液相色谱检测保健品中叶酸含量的方法。方法采用乙醇-水为溶剂从保健品中提取目标物叶酸。采用高效液相色谱法，色谱柱为AgilentXDB(C18250X4.6mm,5um)不锈钢柱，用乙睛/10mmol/L庚烷磺酸钠溶液(1%。三氟乙酸)=15/85作流动相进行洗脱，柱温40°C,流速1.OmL/min,检测波长280nm,进样量为20pLo结果叶酸在范围0.5-lOug/mL与峰面积线性关系良好，相关系数为0.99999,平均回收率RSD为2.0%0结论此方法专属性强，灵敏度高，回收率高，检测限低，分析时间短，简便，准确，适用于保健品中叶酸的含量测定。【关键词】保健品；叶酸；高效液相色谱；含量检测doi：10.3969/j.issn.1004-7484(s).2013.09.606文章编号：1004-7484(2013)-09-5281-02叶酸是一种重要的B族维生素，最初从菠菜叶中提取纯化，故命名为叶酸。叶酸与人体重要的生化过程密切相关，直接影响核酸的合成及氨基酸代谢，对细胞分裂、增殖和组织生长具有极其重要的作用。目前检测叶酸的方法多种多样，本实验旨在探索出一种简便，准确的方法适合叶酸含量测定的批量实验。1材料仪器和试剂1.1仪器高效液相色谱仪（Agilentl260）配紫外检测;水浴锅（上海锦屏仪器仪表有限公司）；超纯水系统；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）。1.2试剂水，乙醇，叶酸标准品，乙月青（色谱纯），庚烷磺酸钠（色谱纯），三氟乙酸。注：水为超纯水，除特别说明外，其他试剂均为分析纯。2试剂配制2.1溶液配置2.1.1标准品溶液的制备精密称取叶酸标准品5.OOOOmg,置50mL量瓶中加30mL水，水浴加热至澄清状，取出容量瓶趁热加入15mL乙醇，待冷却后，加入乙醇定容,摇匀。滤过，取续滤液作为标准品储备液。2.1.2样品溶液的制备取10g以上样品，研碎，混匀,各取0.5g试样，精确称重，置于12个50mL棕色量瓶中（6份加标），加入30mL水，水浴加热，待水浴中水沸腾后10分钟，趁热取出量瓶，各加入15mL乙醇，待冷却后，加入乙醇定容，摇匀，滤过，取续滤液作为样品储备液。该试验需避光操作。2.210mmol/L庚烷磺酸钠溶液（1%。三氟乙酸）准确量取2.02g庚烷磺酸钠至lOOOmL的容量瓶中，加入ImL的三氟乙酸，并用超纯水稀释并定容至刻度。2.3标准储备液的配制准确称取5.OOOOmg的叶酸标准品到50mL的容量瓶中加入30mL纯水，加热溶解，趁热加入15mL乙醇,冷却用乙醇定容到刻度。浓度为1OOug/mLo2.3.1准确吸取标准储备液5mL,放入到50mL的容量瓶,用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为lOng/mLo2.3.2准确吸取标准储备液2.5mL,放入到50mL的容量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为5Pg/mLo2.3.3准确吸取标准储备液1.25mL,放入到50mL的容量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为2.5Pg/mLo2.3.4准确吸取标准储备液0.5mL,放入到50mL的容量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为l.Oug/mLo2.3.5准确吸取标准储备液0.25mL,放入到50mL的容量瓶，用乙醇稀释并定容到刻度。浓度为0.5ug/mLo3色谱条件检测波长：280nm；色谱柱：AgilentXDB(C18250X4.6mm,5um)；柱温：40°C；流动相：乙M/10mmol/L庚烷磺酸钠溶液(1%。三氟乙酸)=15/85;流速：1.0mL/min；进样量：20uLo4实验结果4.1色谱系统试验4.1.1叶酸的保留时间和系统评价取10ug/mL的标准工作液20uL进样分析得出叶酸的保留时间为7.719mino4.1.2标准工作曲线选定的色谱条件下，取标准品溶液2.3.1、2.3.2.2.3.3、2.3.4、2.3.5,进样20uL,记录色谱图，用工作软件绘制出标准工作曲线，得出回归方程、线性范围、相关系数，以峰面积积分值为纵坐标，以叶酸标准品进样量(卩g/mL)为横坐标，计算回归方程：Y=52.531X+0.140,r=0.99999,表明叶酸在0.5-10ug/mL浓度范围内与峰面积的线性关系良好。4.2方法最小检出限将10ug/mL的标准工作液逐级稀释进样记录图谱，得到信噪比(S/N)为4.6：103：1)的浓度为0.025Pg/mL,样品稀释了100倍，基于回收率的考虑，方法的最小检出限定为2.5ug/go4.3稳定性试验同时处理六份相同的样品得出结果计算RSD(%),其RSD值为0.0438%,结果表明本方法的稳定性、精密度、重现性都很好，见表1。5结论叶酸溶于碳酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠等碱性溶液，但叶酸在碱性条件下易分解，稳定...