'乔纳金，苹果及其脆肉变株的表型与分子鉴定摘要：以'乔纳金'苹果品种为对照，从果实与叶片形态、果实硬度、脆度、香气成分等表型特征以及AFLP分子标记两个层面，对脆肉变株进行了鉴定。结果表明：①“乔纳金’苹果与其脆肉变株果实与叶片形态基本一致，但脆肉变株的平均单果重仅是'乔纳金'苹果的83.4%,而果实硬度与脆度分别是'乔纳金’苹果的1・5倍和1.2倍，具有果实变小、硬度及脆度变大的特点；②两份材料果实香气成分种类总数基本一致,但'乔纳金'苹果酯类成分种类多、含量高，而脆肉变株醇类和醛类成分种类多、含量高；③AFLP分子标记聚类分析将侨纳金，及其脆肉变株聚为一类。结论认为，该脆肉变株就是'乔纳金'苹果的脆肉芽变。关键词：乔纳金；脆肉变株；表型特征；AFLP分子标记:S661.102.7文献标识号:A:1001-4942(2013)09-0023-03芽变是体细胞遗传物质的突变，而芽变选种是优中选优，是果树品种改良的有效途径之一，庞大的元帅系及富士系苹果品种群的形成就是一个很好的例证。因此，通过芽变选种，有力推动了苹果品种的升级换代和优化调整［1〜5］。'乔纳金'是以'金冠'和'红玉'为亲本杂交育成的三倍体苹果品种，果个大，品质优，深受欧美市场的消费者欢迎，但贮藏性较差，果实容易软化变绵，影响其产业发展；2004年在山东聊城某苹果园内发现一个'乔纳金'脆肉变株，枝、叶、花、果的形态特征与'乔纳金'基本一致，仅是变异株的果个变小、果肉变脆，很有可能是'乔纳金'苹果的脆肉芽变株。为了进一步明确变异的真伪，本研究从表型及分子两个层血对该变株进行了鉴定，现将研究结果报道如下。1材料与方法1.1材料试验于2008-2012年在山东农业大学作物生物学国家重点实验室进行。试材为采自山东省聊城市南郊郑管屯村苹果园的'乔纳金'及其脆肉变株成熟果实。试验树立地条件一致，常规管理，牛长结果正常。每个品种采果型端正、成熟度一致、无病虫害及机械损伤的30个果实及30片叶片，带回实验室进行各项指标的测定。1.2方法1.2.1果肉硬度与脆度及果实与叶片形态指标的测定果实硬度和脆度采用马庆华等(2011)[6]的方法，用英国StableMicroSystems公司生产的TA.XTplus质构仪，采用P/2n针状探头(直径2mm),测前速度2mm/s,贯入速度1mm/s,测后速度5mm/s,穿刺深度为8mm,最小感知力为10g。每次测定随机取5个果实，在阴阳两面测定；果实重量用百分之一天平测量，果实、叶片纵横径利用游标卡尺测量，测量10个样品作为重复。1.2.2果实香气成分测定分别取'乔纳金’及其变株异成熟果实，洗净切碎后准确称取40g放入100ml锥形瓶中，加入内标物3-壬酮(0.4g/L)5nl,加盖封口后放在50°C磁力搅拌加热板上平衡10min0将纤维萃取头插入250°C的GC进样口老化20min后插入已平衡好的样品瓶中萃取35min,然后插入GC进样口，230°C解吸2min,进行GC-MS检测。气相色谱一质谱分析条件：参照陈美霞等(2005)[7]的方法并略做修改，利用ShimadzuGC/MS-QP2010气相色谱-质谱联用仪。色谱条件：色谱柱Rtx-IMS柱(30mXO.25mmXO.25Um)；进样口温度200°C；柱温：初始温度35°C保持2min,以6°C/min升至120°C保持1min,然后以10°C/min升至180°C后以20°C/min升至230°C保持5min。质谱条件：载气为He,流量1.03ml/inin,电离方式EI,电子能量70eV。离子源温度200°C,扫描质量范围：45〜450amuo进样：不分流进样。定性方法：得到GC/MS分析总离子流图(TTC)后，经计算机检索同时与NIST05质谱库相匹配，并结合人工图谱解及资料分析，确认香味物质的各种化学成分。定量方法：按峰面积归一化法求得各成分的相对质量百分含量，并选择3-壬酮为内标进行定量。1.2.3AFLP分子标记鉴定采用CTAB法提取'乔纳金'及其脆肉变株等29个苹果品种(系)基因组DNA,荧光AFL卩扩增采用苑兆和等(2009)[8]方法在北京鼎国生物技术有限责任公司进行，其中选择性扩增引物MseI为FAM荧光标记引物，用SIIAN程序中的UPGMA方法进行聚类分析，并通过Treeplot模块生成聚类图。2结果与分析2.1'乔纳金'苹果及其脆肉变株果实与叶片指标的比较'乔纳金'苹果与其脆肉变株的果实和叶片形态基本一致(图1),果实均为扁圆形，叶片均为阔卵形，但脆肉变株的平均单果重仅是'乔纳金'苹果的8...